[发明专利]TRAIL突变体在制备治疗痤疮药物中的应用及一种制剂

说明书

本发明提供了TRAIL突变体在制备治疗痤疮药物中的应用及一种制剂，其中TRAIL突变蛋白包括TRAIL‑Mu3、TRAIL‑MuR5、TRAIL‑MuR6、TRAIL‑MuR5S4TR和TRAIL‑MuR6S4TR 5种。实验研究证实，上述5种TRAIL突变体在体外能抑制原代培养皮脂腺细胞增殖，并诱导其凋亡，且它们的生物活性大大强于对照药异维A酸。上述突变体蛋白可以加工制备成乳霜剂、软膏剂、凝胶剂、喷剂、面膜等多种形式。动物实验证明，上述5种TRAIL突变体制剂能够明显抑制和减轻痤疮动物模型的皮损；对痤疮人体，具有较强的治疗作用。

技术领域

本发明涉及药物技术领域，尤其涉及多种不同结构的TRAIL突变体在制备治疗痤疮药物中的应用及一种制剂。

背景技术

1.痤疮的发病与危害

痤疮是一种毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病，是皮肤科的常见病、多发病，尤其在青春期男、女的发病率最高。国内调查，在12～15岁年龄组中约有85％的个体在不同时期发病。国外报告，青春发育期的痤疮发生率女性达到90.6％，男性达100％。痤疮对青少年的心理和社交的影响超过了哮喘和癫痫。鉴于痤疮的流行广泛，而本病又主要在面部，出现粉刺、丘疹、囊肿，甚至个别患者形成瘢痕疙瘩，损毁人的面容，给人带来痛苦和烦恼，影响患者的生活质量。

痤疮在不同患者人群中的表现有差异，可根据皮损性质将痤疮分为3度和4级，其中轻度(I级)：仅有粉刺；中度(II级)：炎性丘疹；中度(III级)：脓疱；重度(IV级)：结节、囊肿。痤疮的治疗应该根据其分级选择相应治疗药物和手段。外用维A酸类药物是目前轻度痤疮的单独一线药物，中重度痤疮的联合用药以及痤疮维持治疗的首选药物。目前常用的外用维A酸类药物包括第一代维A酸类药物如0.025％～0.1％的全反式维A酸乳霜或凝胶和异维A酸凝胶，第三代维A酸类药物如阿达帕林凝胶和他扎罗汀等。由于痤疮的慢性过程和易复发的临床特点，无论哪一级痤疮，均没有一劳永逸的特效疗法。

痤疮的主要病理变化为：(1)皮脂腺分泌过多；(2)毛囊漏斗部角化过度与脱屑减少，形成黑头粉刺；(3)痤疮丙酸杆菌移生进入毛囊；(4)机体的炎症免疫反应。

2.TRAIL与痤疮发病和病理

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)为肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor，TNF)超家族的成员，其基因序列分别于1995年由Wiley等人和1996年由Pitti等人独立克隆获得，后者将其命名为凋亡素2配体(Apo2Ligand，Apo2L)。后来的研究证实，Apo2L与TRAIL实质上是同一种蛋白质，因此习惯上可将其称为Apo2L/TRAIL。TRAIL的功能首先是作为生物体先天性或获得性免疫的调节剂，其次在细胞外源性凋亡途径中作为免疫监视发挥抗肿瘤作用。TRAIL的最大优点是可以选择性地诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞几乎没有毒性。研究资料表明，无论在体外还是体内，Apo2L/TRAIL对于各种来源的人肿瘤细胞系，包括结(直)肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、中枢神经系统肿瘤、甲状腺癌、淋巴瘤、白血病以及多发性骨髓瘤等都具有诱导凋亡的作用。

异维A酸是被FDA批准的，唯一能够改变痤疮病情的药物。A.M Nelson等通过研究发现，虽然异维A酸(13-cis RA)治疗痤疮的全部作用机制尚不清楚，但13-cis RA诱导参与凋亡的脂细胞中的关键基因。单独应用重组人TRAIL(rhTRAIL)蛋白处理可增加SEB-1脂细胞的TUNEL阳性染色，而TRAIL siRNA显著降低了TUNEL阳性SEB-1脂细胞对13-cis RA治疗应答的百分比。与基线相比，异维A酸治疗1周后痤疮患者皮肤中TRAIL表达增加，且TRAIL表达局限于皮脂腺。与脂细胞不同，TRAIL蛋白在正常人表皮角质形成中对13-cisRA的反应没有增加，rhTRAIL也没有诱导角质形成细胞凋亡。实验研究表明，TRAIL是13-cisRA脂细胞特异性凋亡作用的关键。