[发明专利]一种基于细胞水平筛选通过5-羟色氨酸相关途径实现抗抑郁功能的益生菌的方法

说明书

本发明公开了一种基于细胞水平筛选通过5‑羟色氨酸相关途径实现抗抑郁功能的益生菌的方法。利用RIN14B细胞作为筛选模型，通过益生菌与细胞共孵育，检测细胞上清中5‑羟色氨酸的分泌量和细胞中的色氨酸羟化酶1的mRNA水平，以确定能够通过5‑羟色氨酸发挥抗抑郁功效的益生菌。本发明筛选的有效菌株能够缓解抑郁小鼠的抑郁样行为、提高脑中神经递质和神经营养因子的水平、减轻压力导致的下丘脑‑垂体‑肾上腺轴功能亢进，且细胞模型筛选结果与动物实验结果具有显著的相关性。利用本发明能够在短时间批量测定不同菌株的抗抑郁潜力，为抗抑郁功能益生菌的筛选提供了一种更为快速、高效的方法。

技术领域

本发明涉及益生菌筛选技术领域，具体涉及一种基于细胞水平筛选通过5-羟色氨酸相关途径实现抗抑郁功能的益生菌的方法。

背景技术

抑郁症又称抑郁障碍，以显著而持久的情绪低落为主要临床特征。目前全球有超过3.5亿人患有抑郁症，预计到2030年，抑郁症将在全球疾病负担中居第1位。大量研究表明，抑郁症的发生与脑中单胺类神经递质失调有关，主要表现为大脑神经突触间隙的5-羟色胺(5-HT)浓度降低。目前针对抑郁的治疗方式主要集中在提高脑中5-HT的水平，例如临床一线的抗抑郁药物——选择性5-羟色胺重摄取抑制剂(SSRI)。此外，服用5-HT的前体——5羟色氨酸(5-HTP)也具有一定的抗抑郁效果，但因其在人体内半衰期较短，不能用作临床药物。目前针对抑郁的治疗方式主要集中在提高脑中5-HT的水平上。

“脑肠轴”是近年来提出的一个新概念，作为肠内细菌与大脑间的双向通信系统，主要通过神经途径、内分泌途径和免疫途径来调节大脑的功能以及行为。研究表明，抑郁患者的肠道菌群会发生改变，而在动物实验中发现，无菌小鼠的抑郁症状能够减轻，这证明肠道菌群和抑郁的发生、发展存在联系。通过益生菌调节肠道菌群，可成为缓解抑郁症的一种新途径。

目前报道的对抑郁具有缓解作用的益生菌，均通过动物实验证明。然而采用动物作为抗抑郁益生菌的筛选模型，耗时长、成本高，且无法解释其发挥作用的具体机制。细胞模型具有耗时短、成本低、通量高等优点，但目前尚未有抗抑郁益生菌的细胞筛选模型。因此，开发一种基于细胞水平测定来筛选抗抑郁功能益生菌的方法，具有十分重要的科学和实践意义。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种基于细胞水平筛选通过5-羟色氨酸相关途径实现抗抑郁功能的益生菌的方法，其包括，

细胞培养：所述细胞能够表达色氨酸羟化酶1并分泌5-羟色氨酸；

所述细胞用牛血清白蛋白和氟西汀处理后与益生菌共孵育，筛选具有抗抑郁功能的益生菌。

作为本发明所述的基于细胞水平筛选通过5-羟色氨酸相关途径实现抗抑郁功能的益生菌的方法的一种优选方案：所述细胞包括大鼠胰岛瘤细胞RIN14B。

作为本发明所述的基于细胞水平筛选通过5-羟色氨酸相关途径实现抗抑郁功能的益生菌的方法的一种优选方案：所述细胞培养，其中，细胞培养基包括RPMI1640培养基。

作为本发明所述的基于细胞水平筛选通过5-羟色氨酸相关途径实现抗抑郁功能的益生菌的方法的一种优选方案：所述益生菌，包括双歧杆菌属、乳杆菌属、链球菌属、乳球菌属、明串珠菌属、丙酸杆菌属、片球菌属、芽孢杆菌属。