[发明专利]一种非病毒载体共表达IL18的CAR-T细胞构建及其应用在审
| 申请号： | 201810922418.6 | 申请日： | 2018-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN108949695A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 陈相波;冯煜;雷鸣;田朋飞 | 申请（专利权）人： | 杭州荣泽生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/63;C12N15/62;C07K19/00 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 311215 浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 共表达 杀伤肿瘤细胞 非病毒载体 特异性嵌合 抗原受体 细胞构建 转座系统 杀伤 磁珠 抗体 质粒 转染 制备 应用 | ||
1.一种共表达IL18的CD19特异性嵌合抗原受体T细胞的制备方法，通过将含有CD19CAR和IL18的睡美人质粒转座系统电转入T细胞中，从而获得共表达IL18的CD19 CAR-T细胞。
2.根据权利要求1所述的睡美人质粒转座系统，其特征在于，其系统包含有CD19 CAR和IL的睡美人质粒pT/SVNeo和SB11质粒，其特征在于：
(1)利用Bgl II和Not I酶切位点将CMV-CD19 CAR-IL18构建入pT/SVNeo质粒中形成重组载体pT-CMV-CD19 CAR-IL18；
(2)利用PEIpro阳离子聚合物转染试剂转染pT/SVNeo-CMV-CD19 CAR-IL18转座子及辅助转座酶SB11，PEIpro与总质粒质量比为4:1，转座酶SB11与转座子pT-CMV-CD19 CAR-IL18质量比为1:3；
(3)电转染后1天至3天内加入浓度为30ng/ml至120ng/ml的IL2和磁珠细胞比例为3:1的anti-CD3/CD28抗体磁珠；
(4)然后，将激活的细胞培养7-10天。
3.根据权利要求1所述的CD19 CAR分子，其特征在于，包括CD19胞外抗原识别区、铰链区、跨膜区、胞内信号区、T2A区和IL18表达区，其核苷酸和氨基酸序列如序列SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。
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