[发明专利]一种CART细胞制备方法

权利要求书

1.一种方法培养嵌合抗原受体T细胞，以及培养后进行放行检测。

2.权利要求1所述的培养方法，包括：

(I)T细胞的分离活化；

(II)病毒感染活化的T细胞；

(III)CART细胞的扩大培养；

(IV)培养后的CART细胞放行检测。

3.权利要求2所述的T细胞分离，所述方法包括Ficoll梯度离心法。

4.权利要求2所述的T细胞活化，所述方法包括用CD3/CD28抗体活化T细胞或CD3/CD28磁珠活化T细胞。

5.权利要求2所述病毒感染T细胞，所述方法病毒包括逆转录病毒，慢病毒，优选含有所述逆转录病毒载体。

6.权利要求2所述病毒感染T细胞，所述方法包括用Retronectin包被培养板，Retronectin所用剂量为500微升每孔、200微升每孔，优选含有200微升每孔的Retronectin。

7.权利要求2所述CART细胞的扩大培养，所述方法用IL-2作为CART细胞生长因子，持续添加在细胞培养液中，剂量为500IU/ml。

8.权利要求2所述CART细胞的扩大培养，所述方法培养CART细胞的容器为培养皿、培养瓶、G-Rex细胞培养瓶，优选为G-rex细胞培养瓶。

9.权利要求2所述CART细胞放行检测包括包括：CART细胞数量及CART细胞活率、CART细胞表型、CAR阳性率检测、CART细胞生物学效力检测，无菌检查、支原体、热原/内毒素的检测、CAR-T细胞基因组中病毒载体拷贝数及整合的检测、RCR/RCL检测、工艺残留物检测、及肿瘤细胞残留检测。