[发明专利]一种评估CART细胞有效性的方法

说明书

本发明提供了一种评估CART细胞临床前药效学的方法。分为体内实验评估和体外实验评估，系统的阐述了CART细胞进入临床前的药效学检测指标。

技术领域

本发明涉及医药生物领域，具体涉及一种CART细胞制备方法。

背景技术

嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)T细胞是指经基因修饰后，能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段。CAR-T细胞回输治疗是当前肿瘤治疗中最明确有效的免疫治疗形式。大量研究表明，CAR-T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，显著改善患者的生存状况。

嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件，赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen，TAA)结合区(通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFV段)，一个胞外铰链区，一个跨膜区和一个胞内信号区。目标抗原的选择对于CAR的特异性、有效性以及基因改造T细胞自身的安全性来讲都是关键的决定因素。

CART细胞在做临床实验之前要系统的做药效、药代、药动、药理、毒理的评估，全面摸清CART细胞的安全性有效性。本发明系统阐述CART临床前有效性评估方法。

发明内容

本发明的一个方面提供一种评估CD19-CART细胞有效性的方法包括体外实验评估方法和体内实验评估方法。

本发明的第二方面提供了体外实验评估方法，包括：

(Ⅰ)细胞表型检测；

(Ⅱ)CAR靶向性检测；

(Ⅲ)细胞因子胞内染色分析；

(Ⅳ)细胞杀伤实验分析。

优选的是，细胞表型检测包括成功感染病毒的CAR⁺细胞比例，CD8/CD4比例，CD45RO/CD62L比例。

优选的是，CART细胞靶向性检测包括CAR蛋白对肿瘤细胞亲和力检测。

优选的是，细胞因子胞内染色分析包括INFγ与CD107a检测分析。

优选的是，细胞杀伤实验即CART细胞对肿瘤细胞的杀伤分析。

本发明的第三方面提供了体内实验评估方法，包括：

(Ⅰ)免疫缺陷小鼠淋巴瘤模型；

(Ⅱ)正常免疫小鼠淋巴瘤模型。

优选的是，免疫缺陷小鼠为NOG小鼠。

优选的是，正常免疫小鼠为Balb/c小鼠。

优选的是，免疫缺陷小鼠淋巴瘤模型包括单剂量注射CART细胞模型和多剂量注射CART细胞模型来评估CART细胞对肿瘤细胞体内药效结果。

本发明具有以下有益效果：

本发明全面的评估CART细胞有效性的方法。

附图说明

图1 CART细胞体内能显著延长荷瘤小鼠生存期

具体实施方式

实施例