[发明专利]一种三维肿瘤球培养基添加剂、培养基以及三维肿瘤球培养方法

权利要求书

1.一种三维肿瘤球培养基添加剂，其特征在于，含有甲基纤维素和结冷胶。

2.根据权利要求1所述的培养基添加剂，其中，甲基纤维素和结冷胶的质量比为10:1。

3.一种三维肿瘤球培养基，其成分为肿瘤细胞培养用培养基，其特征在于，还含有甲基纤维素和结冷胶。

4.根据权利要求3所述的培养基，其成分为DMEM/F12+EGF 20ng/ml+FGF 20ng/ml+B272％，所述B27是以体积比1:50添加，其特征在于，还含有甲基纤维素和结冷胶。

5.根据权利要求3或4所述的培养基，其中，按质量体积比计算，含有0.3％的甲基纤维素和0.03％的结冷胶。

6.一种三维肿瘤球的培养方法，其包括如下步骤：

1)将肿瘤细胞消化并计数，并将消化好的肿瘤细胞按10³-10⁵cells/ml，接种到权利要求3-5任一项所述的三维肿瘤球培养基中，37℃，5％CO₂培养；

2)在肿瘤球培养的第3-5天，待到溶液变黄，更换培养基；

所述更换培养基操作为：

将含肿瘤球的培养基加至离心管，加入等体积DMEM溶液稀释；

离心机以200g离心，离心10分钟；

去除旧培养基，加入新培养基；

3)培养5-7天后，待形成直径超过100μm的肿瘤球，加入等体积DMEM溶液，离心获取肿瘤球。