[发明专利]一种具有抑菌活性的苯并氮氧杂卓类化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种制备苯并氮氧杂卓类化合物的方法，其特征在于，所述苯并氮氧杂卓类化合物具有如下式(1)所示的结构：

所述方法包括以疣孢菌Verrucosispora gifhornensis FIM06-0025进行发酵培养的步骤，以及从所得发酵液中提取所述苯并氮氧杂卓类化合物的步骤；

所述疣孢菌Verrucosispora gifhornensis FIM06-0025保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15242，保藏日期为2018年01月18日；

所述发酵培养步骤包括将所述的疣孢菌Verrucosispora gifhornensis FIM06-0025接种到发酵培养基中，于26℃、240rpm条件下进行摇床发酵培养4-5d的步骤，并收集发酵液；

所述发酵培养基每升含有：可溶性淀粉20.0g，K₂HPO₄ 0.5g，KNO₃ 5.0g，MgSO₄·7H₂O0.5g，NaCl 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，CaCO₃ 1.0g，余量为海水，调pH7.2-7.5；

所述提取苯并氮氧杂卓类化合物的步骤具体包括：

(1)将收集的发酵液经固液分离，得到菌丝体和上清液，备用；

(2)取分离的菌丝体加入甲醇和丙酮的混合溶剂进行提取，并将所得提取液浓缩去除溶剂，得到第一浸膏；将所得第一浸膏与分离的所述上清液合并，并加入乙酸乙酯进行萃取，经浓缩得到第二浸膏；

(3)将所得第二浸膏经C18反相硅胶柱层析，并分别以体积比30：100、50：100、70：100、70：90的甲醇-水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，并收集洗脱剂的洗脱浓度为70：100的组分，得到第一组分A-1；

(4)将所得第一组分A-1经硅胶柱层析，并以氯仿-甲醇溶液为洗脱剂，从体积比9：1-1：1进行梯度洗脱，分别收集洗脱液，经TLC检测，以体积比10：1的氯仿-甲醇为展开剂，碘为显色剂，合并相同组分，并收集TLC检测Rf值为0.55的组分，得到第二组份A-2；

(5)将所得第二组份A-2经Sephadex LH-20柱层析，并以体积比1：1的甲醇-乙腈溶液为洗脱剂，收集洗脱流份经TLC检测，以体积比10：1的氯仿-甲醇为展开剂，并收集Rf值为0.61的组分，即得如式(1)所示结构的苯并氮氧杂卓类化合物。

2.根据权利要求1所述的制备所述苯并氮氧杂卓类化合物的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述提取步骤为超声提取。

3.一种疣孢菌株用于发酵制备苯并氮氧杂卓类化合物的用途，其特征在于，所述苯并氮氧杂卓类化合物具有如下式(1)所示的结构：

所述疣孢菌株分类命名为疣孢菌Verrucosispora gifhornensis FIM06-0025，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15242，保藏日期为2018年01月18日。