[发明专利]一种快速检测β-淀粉样蛋白的量子点免疫层析试纸条与应用

权利要求书

1.一种快速检测β-淀粉样蛋白的量子点免疫层析试纸条，其特征在于包含设有检测区和质控区的硝酸纤维素膜、包被量子点微球偶联Aβ40和Aβ42多克隆抗体的玻璃纤维膜；

所述的设有检测区和质控区的硝酸纤维素膜依次设有Aβ40单克隆抗体、Aβ42单克隆抗体和DNP抗体，形成检测区T1、检测区T2和质控区C。

2.根据权利要求1所述的快速检测β-淀粉样蛋白的量子点免疫层析试纸条，其特征在于：

所述的检测区T1和检测区T2之间的间距为0.5cm；

所述的检测区T2和质控区C之间的间距为0.5cm。

3.根据权利要求1所述的快速检测β-淀粉样蛋白的量子点免疫层析试纸条，其特征在于：

所述的设有检测区和质控区的硝酸纤维素膜的制备方法，包含如下步骤：

(1)将Aβ40单克隆抗体、Aβ42单克隆抗体用含有海藻糖的磷酸盐缓冲液分别稀释至浓度为1.0～2.5mg/mL，DNP抗体稀释至浓度为0.75～2.5mg/mL，得到β40单克隆抗体工作液、Aβ42单克隆抗体工作液和DNP抗体工作液；

(2)将步骤(1)制得的β40单克隆抗体工作液、Aβ42单克隆抗体工作液和DNP抗体工作液分别在硝酸纤维素膜上划膜，形成检测区T1、检测区T2和质控区C，干燥，得到设有检测区和质控区的硝酸纤维素膜。

4.根据权利要求3所述的快速检测β-淀粉样蛋白的量子点免疫层析试纸条，其特征在于：

步骤(1)中所述的含有海藻糖的磷酸盐缓冲液为含有质量分数为1％海藻糖的0.01M磷酸盐缓冲液，pH7.5～8.5。

5.根据权利要求1所述的快速检测β-淀粉样蛋白的量子点免疫层析试纸条，其特征在于：

所述的包被量子点微球偶联Aβ40和Aβ42多克隆抗体的玻璃纤维膜的制备方法，包含如下步骤：

(1)QD₆₅₅量子点微球标记Aβ40多克隆抗体、QD₅₆₅量子点微球标记Aβ42多克隆抗体

将QD₆₅₅量子点微球、QD₅₆₅量子点微球分别用活化缓冲液洗涤并稀释，得到QD₆₅₅量子点微球溶液、QD₅₆₅量子点微球溶液；将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与QD₆₅₅量子点微球溶液、QD₅₆₅量子点微球溶液分别混合，25℃±0.1℃振荡30～60min，离心，弃上清，然后用偶联液洗涤，得到洗涤后的QD₆₅₅量子点微球、QD₅₆₅量子点微球；然后按照每毫克量子点微球加入10μg抗体蛋白的配比，在洗涤后的QD₆₅₅量子点微球、QD₅₆₅量子点微球中分别加入Aβ40多克隆抗体、Aβ42多克隆抗体，2～8℃振荡18～24h；加入封闭液25℃±0.1℃振荡60～120min，离心，弃上清，然后用保存液洗涤并稀释，分别得到QD₆₅₅量子点微球标记的Aβ40多克隆抗体、QD₅₆₅量子点微球标记的Aβ42多克隆抗体；

(2)QD₆₅₅量子点微球或QD₅₆₅量子点微球标记DNP-BSA

将QD₆₅₅量子点微球或QD₅₆₅量子点微球用活化缓冲液洗涤并稀释，得到QD₆₅₅量子点微球溶液或QD₅₆₅量子点微球溶液；将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与QD₆₅₅量子点微球溶液或QD₅₆₅量子点微球溶液混合，25℃±0.1℃振荡30～60min，离心，弃上清，然后用偶联液洗涤，得到洗涤后的QD₆₅₅量子点微球或QD₅₆₅量子点微球；然后按照每毫克量子点微球加入10μg蛋白的配比，在洗涤后的QD₆₅₅量子点微球或QD₅₆₅量子点微球中加入DNP-BSA，2～8℃振荡18～24h；加入封闭液25℃±0.1℃振荡60～120min，离心，弃上清，然后用保存液洗涤并稀释，得到QD₆₅₅量子点微球标记的DNP-BSA或QD₅₆₅量子点微球标记的DNP-BSA；

(3)将步骤(1)制得的QD₆₅₅量子点微球标记的Aβ40多克隆抗体、QD₅₆₅量子点微球标记的Aβ42多克隆抗体和步骤(2)制得的QD₆₅₅量子点微球标记的DNP-BSA或QD₅₆₅量子点微球标记的DNP-BSA等体积混合，得到混合物；将混合物涂覆在玻璃纤维膜上，干燥，得到包被量子点微球偶联Aβ40和Aβ42多克隆抗体的玻璃纤维膜。