[发明专利]一种免疫联合佐剂及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种免疫联合佐剂及其制备方法与应用，属于兽用生物制品及其制备方法。该制剂由遴选的三种成分：CpG‑ODN、MDP、FIA制备而成，其免疫佐剂活性强，靶向性强，安全，能高效提高抗原免疫效果。

技术领域

本发明属于兽用生物制品及其制备方法，更确切地说，涉及一种免疫联合佐剂及其制备方法与应用。

背景技术

佐剂能显著提高抗原免疫原性或改变抗原诱导机体产生免疫应答类型，使机体免疫细胞向更合理的方向活化而产生人们预期的免疫反应及强度，因此，佐剂已成为疫苗研究的关键组成部分。目前，常用佐剂主要有无机佐剂、有机佐剂、油佐剂和新型佐剂，前三种佐剂在临床应用存在着各自不足，不同程度地限制了它们的使用。另外，研究表明，单独使用某一种佐剂产生的免疫效果不足以达到人们预期效果，并对改善抗原反应强度、免疫力维持时间等作用有限，不能达到理想效果。

发明内容

本发明的目的旨在解决上述问题，提供一种安全、高效、靶向性强且能够用于预防S.aureus感染疫苗的免疫联合佐剂。

首先，本发明提供一种免疫联合佐剂，包括CpG基序的寡聚脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynucleotides，CpG-ODN)，胞壁酰二肽(Muramyl Dipeptide，MDP)和不完全弗罗因德佐剂(Freund’s Incomplete Adjuvant，FIA)。

优选地，CpG-ODN由遴选的含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸组成，并且，组成的CpG-ODN有磷硫酰修饰。

优选地，所述免疫联合佐剂由5-400ng/mL的CpG-ODN溶液、5-400ng/mL的MDP的溶液与FIA按体积比例1：1：(1-8)混合制成。

另外，本发明还提供一种上述免疫联合佐剂的制备方法，步骤如下：

(1)分别溶解CpG-ODN、MDP与FIA，配制成CpG-ODN溶液、MDP溶液。

(2)将步骤(1)所制备的CpG-ODN溶液、MDP溶液与FIA混合均匀即得免疫联合佐剂。

优选地，步骤(1)所述CpG-ODN与MDP分别溶解在ddH₂O、0.85(wt)％NaCl溶液或PBS(PH＝7.4)溶液中，最优选PBS，PBS溶剂溶解CpG-ODN与MDP增强溶液稳定性。

优选地，CpG-ODN溶液与MDP溶液浓度为5-400ng/mL，最优选400ng/mL。

CpG-ODN溶液与MDP溶液配制后4℃保存备用。

优选地，步骤(2)所述CpG-ODN溶液、MDP溶液与FIA体积比为1:1:(1-8)。

同时，本发明还提供一种上述免疫联合佐剂在制备免疫原中的应用。

上述应用，步骤为：将所述免疫联合佐剂与靶标抗原混合，乳化后制成免疫原。制成的免疫原中，CpG-ODN与MDP终浓度均为30ng/mL，靶标抗原终浓度为0.5mg/mL_。

本发明的有益效果：

(1)该佐剂能够有效促进Th1、Th2和Th17活化、增殖和分化，具有高效、靶向性。

(2)由于该联合佐剂能够有效发挥各自免疫优势作用，产生高效协同佐剂活性，从而高效提高靶标抗原的免疫原性。

(3)由于预防S.aureus感染关键在于选择新型免疫佐剂协同靶向激活Th1、Th17细胞、选取高效缓释抗原系统，从而最大程度地提高靶标抗原免疫原性，达到有效预防S.aureus感染目的，而该联合佐剂非常适合这方面的需要，因此其具有广阔的市场应用前景。

附图说明