[发明专利]一种重组变构胶原酶的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种组合物，包含纯度98％以上重组变构胶原酶，其中所述重组变构胶原酶为溶组织梭菌中表达胶原蛋白酶ColH的451位点谷氨酸被突变成天冬氨酸，所述重组变构胶原酶的序列如SEQ ID NO：2所示。

2.一种制备纯度98％以上重组变构胶原酶的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，所述重组变构胶原酶的序列如SEQ ID NO：2所示：

(1)重组变构胶原酶菌种构建，其中所述重组变构胶原酶为溶组织梭菌中表达胶原蛋白酶ColH的451位点谷氨酸被突变成天冬氨酸；

(2)重组变构胶原酶菌种发酵；

(3)Capto Phenyl HS疏水层析：平衡Capto Phenyl HS疏水层析柱，将菌体破碎上清经过硫酸铵沉淀重悬后上样，洗脱液进行洗脱，收集洗脱峰，得到收集液；

(4)Capto Q阴离子交换层析：平衡Capto Q阴离子交换层析柱，将步骤(3)得到的收集液上样，洗脱，收集主峰，得到收集液；

(5)CaptoOctyl疏水层析：平衡CaptoOctyl疏水层析柱，将步骤(4)得到的收集液上样，洗脱，收集主峰，得到收集液；(6)Phenyl HP疏水层析：平衡Phenyl HP疏水层析柱，将步骤(5)得到的收集液经过高盐处理后上样，洗脱，收集主峰，得到收集液；

(7)Source 15Q阴离子交换层析：平衡Source 15Q阴离子交换层析柱，将步骤(6)得到的收集液上样，洗脱，收集主峰，得到收集液；

(8)将步骤(7)得到的收集液通过超滤置换缓冲液，浓缩，过滤除菌，冻干，得到终产品。

3.如权利要求2所述的方法，其中，步骤(1)重组变构胶原酶菌种构建过程中所使用的宿主菌为BL21(DE3)。

4.如权利要求2所述的方法，其中，步骤(2)重组变构胶原酶菌种发酵过程中发酵温度为27-32摄氏度。

5.一种组合物，包含权利要求2-4任一项所述方法制备得到的重组变构胶原酶。

6.如权利要求1或5所述的组合物，进一步包括药学上可接受的载体。

7.如权利要求1或5所述的组合物，组合物的剂型为注射剂或局部制剂。

8.如权利要求7所述的组合物，其中注射剂为注射液或粉针，局部制剂为霜剂、乳剂或溶液。

9.权利要求1或5所述的组合物在制备用于减少疤痕以及减少和/或消除脂肪的药物、化妆品或保健品中的用途，其中所述脂肪为皮肤表面脂肪、皮下脂肪组织或脂肪瘤。