[发明专利]一种凉粉草酸性多糖的脱色方法

权利要求书

1.一种凉粉草酸性多糖的脱色方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

（1）原料预处理：净选凉粉草，清除杂草、腐叶，将原料凉粉草粉碎至10~40目待用；

（2）乙醇除杂：第一次加入6~8倍凉粉草重量的75% 的乙醇先浸泡12 ~24 h，第二次用4~5 倍量70% 乙醇浸泡6 ~12 h，将凉粉草放入通风橱待乙醇挥发完全后，再移至40℃烘箱烘干，得到脱脂凉粉草粉末；

（3）弱碱水提：将上述挥干乙醇的凉粉草用浓度为0.5～2.0% 的碳酸钠水溶液、控制料液比为1:20～1:10，80~95℃下提取，提取时间 2～4 h，浸提后稍微冷却，趁热用纱布过滤，滤液离心，收集滤液，滤渣反复提取两次，合并滤液，将提取液用旋转蒸发仪旋蒸真空浓缩，减压低温至原滤液的1/3体积后，于4℃保存备用；

（4）粗多糖酶解：将步骤（3）中得到的浓缩滤液，加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量为浓缩滤液的3-5 w/w %，于35～45℃反应30～60 min，酶解后将酶解液置于沸水灭酶 5min，将灭酶后的酶解液进行离心 控制离心转速为4800 rpm，时间5min，取上清液，备用；

（5）凉粉草多糖上清液超声-双氧水脱色：将步骤（4）中所得的凉粉草多糖上清液中加入浓度为30%的双氧水，用氨水调节pH 8～10，混匀，所述的双氧水占凉粉草多糖上清液体积比的2～5 %，其中超声功率：100～150 W，超声时间0.5~1 h，温度35～45℃，同时搅拌，双氧水脱色机理为：

H₂O₂ +•OH → H₂O + •HO₂

•HO₂ +•OH → H₂O + O₂

•OH + •OH → H₂O₂；

（6）AKTA-大孔树脂层析系统脱色：将所述上清液通过AKTA-AB-8 大孔吸附树脂层析系统进行脱色，其取经预处理的AB-8大孔树脂于250 mL三角瓶中，装入内径为50 mm的层析柱，高度为600 mm，

上样量为 18-20 mL，流速为 1-1.5 mL/min；以示差检测器在线检测多糖，紫外检测器在线辅助检测蛋白质；根据在线检测情况收集多糖组分；多糖组分富集、在50℃~60℃下减压浓缩；

（7）透析：使用透析袋，所述透析袋截留分子量为9000，将AKTA-大孔树脂层析系统脱色后收集的多糖进行透析处理，然后通过旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/3～1/4；

（8）离心：控制离心转速为4500 rpm，离心10 min，在浓缩液中加入无水乙醇，丙酮，静置、离心，收集沉淀；

( 9 )多糖的获得：沉淀用蒸馏水在超声波清洗器中超声辅助溶解后，进行透析，所述透析袋截留分子量14000、减压浓缩、冷冻干燥处理，即得到脱色的多糖。