[发明专利]疥螨几丁质酶样蛋白基因和/或其表达的蛋白的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了疥螨几丁质酶样蛋白基因和/或其表达的蛋白的应用。本发明以疥螨几丁质酶样蛋白(SsCLP)作为抗疥螨疫苗蛋白进行免疫实验，结果显示疥螨几丁质酶样蛋白具有强反应性和良好的免疫原性，并表现出对动物明显的免疫保护作用，成为疥疮的防控新措施，特别是在疥螨引发的兔疥疮中。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及疥螨几丁质酶样蛋白基因和/或其表达的蛋白的应用。

背景技术

疥疮是一种由疥螨(Sarcoptes scabiei)引起的高度接触性传染的寄生虫病，对全球人类和动物的健康构成巨大威胁，临床症状包括皮肤炎症，皮疹，瘙痒和皮肤痂皮增厚，在病程后期动物会发生消瘦。疥螨宿主广泛，感染发生在100多种哺乳动物中。疥疮在社会弱势群体广泛存在，如土着居民和发展中国家贫困的地区。疥螨病不受控制的传播引发了严重的死亡率，这对动物福利和经济损失具有重大影响。此外，在热带气候下，经常发生化脓性链球菌或金黄色葡萄球菌感染，导致严重的皮肤脓皮病。

目前，杀螨剂是用于控制螨虫的有效途径。然而，杀螨剂的耐药性及其毒性可能会阻碍其发展。此外，杀螨剂残留物对健康有害并对环境构成威胁。相比之下，有效的抗螨疫苗在安全性，环境友好性和经济成本方面都将会更有优势，能更有效地保护人和动物。

疥螨入侵可诱导宿主的先天性和适应性免疫反应。据报道，疥螨感染动物后可诱发宿主产生保护性免疫。这些发现表明将来有可能开发一种控制疥螨的疫苗。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供疥螨几丁质酶样蛋白基因和/或其表达的蛋白的新应用，使得所述基因表达的疥螨几丁质酶样蛋白具有强反应性和良好的免疫原性，可对动物表现出免疫保护作用，应用到相关疫苗的制备中；

本发明的另外一个目的在于提供含上述疥螨几丁质酶样蛋白基因的重组载体和/或其表达的蛋白在制备防治疥疮的疫苗中的应用；

本发明的另外一个目的在于提供利用上述蛋白制备的防治疥疮的疫苗。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

疥螨几丁质酶样蛋白基因和/或其表达的蛋白在制备防治疥疮的疫苗中的应用。

本发明根据疥螨基因组学数据(基因登录号：JXLN01012673.1)与疥螨蛋白组学数据(基因登录号：KPM08736.1)，确定了疥螨一个疥螨几丁质酶样蛋白(SsCLP)基因，序列如SEQ ID NO:1所示，DNA全长序列长1701bp，包含一个1251bp的开放阅读框(ORF)，编码416个氨基酸残基的蛋白。本发明选取SsCLP核苷酸457位至1251位作为目标蛋白的表达基因，其包含一个795bp的ORF(SEQ ID NO:2所示)，编码一个264个氨基酸残基的蛋白(30.9kDa，序列如SEQ ID NO:3所示)，pI为8.92，该蛋白无信号肽和跨膜结构域，且具有较强的亲水性。系统发育分析表明，该SsCLP基因被归为第五分支，该序列与埋内欧尘螨(Euroglyphusmaynei)CLP具有较高的同源性(图1)。

本发明通过体外重组技术获得了含SEQ ID NO:2所示序列的重组载体(SEQ IDNO:2所示序列+基础载体序列)，并进一步获得了重组蛋白rSsCLP(49kDa，SEQ ID NO:3所示氨基酸+基础载体表达的氨基酸)，自然感染S.scabiei的兔血清样品和抗rSsCLP兔血清样品都能识别抗原rSsCLP蛋白，显示大小49kDa蛋白信号条带，表明SsCLP重组蛋白具有强反应性和良好的免疫原性。健康兔血清样品无法识别抗原蛋白信号。以自然感染S.scabiei的兔血清样品识别疥螨粗提取物作为内参，结果显示大小45kDa(416个氨基酸残基)蛋白质信号。