[发明专利]一种拉莫三嗪胶体金试纸条的制备方法

权利要求书

1.一种拉莫三嗪胶体金试纸条的制备方法，其特征在于：包括：

样品垫的制备：将玻璃纤维或聚酯纤维用样品垫处理液浸泡，然后取出脱水，接着将样品垫放入干燥箱内，烘干至湿度为19~21%得到样品垫；

金标垫的制备：将玻璃纤维或聚酯纤维用金标垫处理液浸泡，然后取出脱水，接着将金标垫放入干燥箱内，烘干至湿度为19~21%，再在相对湿度为20-40％，室温条件下，用BIODOT仪器的AIRJET喷头将拉莫三嗪单克隆抗体-胶体金标记物均匀喷涂在所述金标垫上，喷点参数为4~6ul/cm²；然后置于37℃条件下干燥, 至湿度为19~21%；

反应膜的制备：用磷酸缓冲液将拉莫三嗪半抗原-卵清蛋白偶联物稀释，用划膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上形成检测线，用磷酸盐缓冲液将羊抗鼠抗抗体稀释，用划膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上形成质控线C，将包被好的反应膜置于37 ℃条件下干燥2 h；

将样品垫、金标垫、反应膜、吸水垫依次按顺序粘贴在PVC背板上；金标垫从起始端有一定区域被样品垫覆盖，金标垫的末端与反应膜的始端连接，反应膜的末端与吸水垫的始端相连，样品垫的始端与PVC背板的始端对齐，吸水垫的末端与PVC背板的末端对齐；所述反应膜的检测线和质控线均呈与所述试纸条的长度相垂直的条状带；检测线位于金标垫的末端的一侧；质控线位于远离金标垫的末端的一侧；

拉莫三嗪半抗原的制备方法：

称取盐酸拉莫三嗪0.2mmol，置于25mL单口瓶中，加入DMF5mL，搅拌溶解；加入无水碳酸钾固体69mg，混匀；10min后，加入4-溴丁酸乙酯32μL，加干燥管隔绝外界水汽，控温55～60℃，搅拌反应6h，TLC法跟踪反应进程；反应完毕后，冷却至室温，加入冰水20mL搅拌均匀，用乙酸乙酯10mL萃取3次，合并有机相；用饱和食盐水20mL、水20mL各洗涤1次，收集有机相；无水硫酸钠干燥2h，过滤，减压回收溶剂，得浅黄色油状物80mg；

将上述浅黄色油状物溶于3mL无水乙醇中，加入饱和氢氧化锂溶液，室温搅拌反应3h；反应完毕，加入冰水30mL，搅拌均匀，用1mol/L 盐酸调pH6～6.5，用三氯甲烷10mL萃取3次，合并有机相，经洗涤，干燥，减压回收溶剂得拉莫三嗪半抗原62mg；

拉莫三嗪半抗原-卵清蛋白偶联物的制备方法：

将400mg卵清蛋白溶于50ml pH值为8.0的PBS缓冲液中，得到卵清蛋白溶液，然后加入8mmol的拉莫三嗪半抗原，并立即边搅拌边滴加体积分数为40%的甲醛溶液，甲醛滴加过量，用1M的NaOH调节pH 值在8.0，有白色絮状物质出现，继续搅拌2小时；将反应液过滤得到澄清的滤液，滤液封口放入4℃冰箱过夜。

2.根据权利要求1所述的拉莫三嗪胶体金试纸条的制备方法，其特征在于：所述样品垫处理液由质量分数为0.4~0.7%的牛血清蛋白溶液和pH值为7 .2的0 .1mol/L的磷酸盐缓冲液混合后构成。

3.根据权利要求1所述的拉莫三嗪胶体金试纸条的制备方法，其特征在于：所述金标垫处理液由质量分数为0.4~0.7%的牛血清蛋白溶液和pH值为7 .2的0 .1mol/L的磷酸盐缓冲液混合后构成。

4.根据权利要求1所述的拉莫三嗪胶体金试纸条的制备方法，其特征在于：所述拉莫三嗪单克隆抗体-胶体金标记物的制备方法包括：取1ml胶体金溶液于试管中，加入0.2M的K₂CO₃溶液1.5-3.0μl，搅拌均匀后得到胶体金溶液，然后向胶体金溶液中加入20-50μg拉莫三嗪单克隆抗体，搅拌混匀，室温静置，加入质量分数为10%的牛血清蛋白溶液，混匀后静置10 min，然后在4℃条件下，以12000r/min离心5分钟，沉淀用复溶缓冲液洗涤，用体积为初始胶体金体积1/10的复溶缓冲液将沉淀重悬。