[发明专利]一种全自动在线检测血清中自由态小分子化合物的方法

权利要求书

1.一种全自动在线检测血清中自由态小分子化合物的方法，其特征在于，包括：

（1）利用双三元液相色谱仪的自动进样器直接吸取血清样品，使用pH=7的超纯水作为负载流动相向净化柱正向加载，并对分析柱进行冲洗；

（2）在血清样品加载完成后，对所述净化柱反冲洗脱目标化合物，并对所述分析柱进样；

（3）在反冲洗脱阶段结束后，进行自由态小分子化合物质谱检测；

其中，所述双三元液相色谱仪的左泵和右泵所使用的流动相溶剂按如下方式配制：

左泵流动相：A: 超纯水；B: 乙腈；C: 甲醇：乙腈：水：异丙醇=1:1:1:1；右泵流动相：A:10 mmol/L 醋酸铵，pH=5；B: 乙腈；C: 甲醇：乙腈：水：异丙醇=1:1:1:1；

所述自由态小分子化合物选自雷尼替丁、西咪替丁、甲氧苄啶、普萘洛尔、地西泮、三甲基磷酸酯、6-羟基-2,2'，4,4'-四溴二苯醚或四溴双酚A；

其中，所述方法的在线固相萃取以及液相色谱加载和洗脱条件为：

其中，a. 表示样品负载和样品分析过程六通阀位置；b. 表示样品洗脱过程六通阀位置。

2.根据权利要求1所述的方法，其中， 10 mmol/L醋酸铵溶液的配制方法为：取0.77g醋酸铵，与990 mL超纯水混合，用冰醋酸调节pH至5后，再加水稀释至1000 mL后混匀。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述净化柱采用湍流固相萃取柱TurboflowCyclone-P、Turboflow Cyclone、C18色谱柱或者C18-P XL色谱柱。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述分析柱采用硅胶基质碳18反相色谱柱Acclaim 120 C18、Zorbax Extend C18色谱柱或者Waters sunfire C18色谱柱。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（1）中，所述左泵依次通过第二管路接口、第一管路接口、净化柱、第四管路接口、第三管路接口与废液池连接，用于在所述净化柱上正向加载血清样品；所述右泵依次通过第五管路接口、第六管路接口与所述分析柱连接，用于对所述分析柱进行净化冲洗。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（2）中，所述左泵依次通过第二管路接口、第三管路接口与废液池连接；所述右泵依次通过第五管路接口、第四管路接口、净化柱、第一管路接口、第六管路接口与分析柱连接，用于对所述净化柱反冲洗脱目标化合物，实现对样品在分析柱上的富集。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（3）中，所左泵依次通过第二管路接口、第一管路接口、净化柱、第四管路接口、第三管路接口与废液池连接，用于正向冲洗净化柱；所述右泵依次通过第五管路接口、第六管路接口与所述分析柱连接，样品流出所述分析柱接入三重四级杆质谱检测仪，由所述三重四级杆质谱检测仪对血清样品中的自由态小分子化合物进行质谱检测。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述血清样品处理的方式为：血清样品离心匀质后，不经过任何处理，直接进行检测。