[发明专利]一种测定生物样品中姜黄素和紫杉醇含量的HPLC分析方法

说明书

本发明涉及药物动力学分析领域，具体涉及一种测定生物样品中姜黄素和紫杉醇含量的HPLC方法。该方法依次包括标准曲线的建立和样品检测两个步骤，其特征在于，HPLC分析方法的条件为：采用Luna ® 5μm C18（4.6mm×250 mm）色谱分析柱，采用梯度洗脱变波长方法。本方法仅采用HPLC即实现了生物样品中姜黄素和紫杉醇含量的同步测定，快速的提高了姜黄素和紫衫醇联合用药的药代动力学研究的效率，能快速促进了姜黄素和紫衫醇联合用药的开发进程，为研发的企业和科研机构大幅的降低时间、人力和经济成本。

技术领域

本发明涉及药物动力学分析领域，具体涉及一种测定生物样品中姜黄素和紫杉醇含量的HPLC方法。

背景技术

姜黄素(CU)是一种从中药中分离提纯的单体，是植物界很稀少的具有二酮的色素，

为二酮类化合物，为橙黄色结晶粉末，不溶于水。具有抗炎、抗肿瘤、抗衰老等药理作用，高效低毒，作为新一代抗肿瘤药物前景良好。主要是从阻断信号通路传导NF-κB、STAT3及MAPK，调控相关肿瘤基因和蛋白表达BcL-2、p53等，调节黏附分子的介导，抑制肿瘤血管生成等方面实现其抗肿瘤的作用。

紫杉醇(PTX)是具有抗癌活性的天然二萜类化合物。多年以来是临床上治疗乳腺癌的一线化疗药物，并且对多种难治疗的恶性肿瘤有疗效显著，如睾丸胚胎癌、胆囊癌、非小细胞肺癌、卵巢癌。但其长期应用毒副作用较强，可导致严重的超敏反应、多药耐药和胃肠道刺激，甚至骨髓抑制。在临床中应用较多的治疗恶性肿瘤的是以顺铂联合PTX为主的化疗方案，但毒副作用未得到缓解。近年来研究者都倾向于寻找一种与PTX联用可减毒增效的物质来治疗恶性肿瘤。

近年来研究表明，CU能够减慢细胞对PTX的清除速度，增加PTX的有效浓度，逆转细胞对PTX的耐药性产生，且已证实两药联用增强对子宫内膜癌细胞的杀伤作用，对小鼠转移性肺癌也有明显作用，对人喉癌和肝癌疗效显著增加。两药联用在肝癌、肺癌、卵巢癌、口腔癌等方面研究较多，已取得一定的成果，因此研究两药联用的药动学的分析方法具有重要意义。

目前对于CU和PTX的药动学研究，测定其生物样品浓度的HPLC法，均为单独测定其药物浓度，未见其联用的药动学评价分析方法(张一唱,龚元,方慧琼,等.姜黄胶囊中姜黄素在大鼠体内药动学和组织分布[J].中国药师,2018(1):65-68；许杜娟,黄灿,苏涌,等.注射用紫杉醇脂质体药代动力学研究[C].全国治疗药物监测学术年会.2014)。此外，还有研究建立了分别测定CU和PTX及同时测定二者生物样品药物浓度的UPLC-MS/MS，但对于生物样品的处理操作繁琐及对所使用的仪器要求高(李智宁,魏悦,朱杰,等.超高效液相色谱-质谱法测定大鼠血浆中的姜黄素[J].河南科学,2017,35(8):1252-1257；石永辉,余晓霞,吕立,等.

HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中紫杉醇的含量[J].今日药学,2017(11):735-738；李金银,房晶,李文学,等.高通量分析紫杉醇在动物体内的药动学及组织分布[J].中国医药,2014,9(12):1833-1837)。CU和PTX的药动学研究现有技术仍存在如下缺点：现有方法仅能单独测定CU和PTX生物样品含量，难以实现CU和PTX联用；而采用UPLC-MS/MS方法同时测定CU和PTX含量时，样品预处理和测定操作繁琐，耗时长，对仪器设备要求高。

发明内容

为解决上述问题本发明提供一种测定生物样品中姜黄素和紫杉醇含量的HPLC分析方法，上述HPLC方法无需与质谱仪联用即可同步测定姜黄素和紫杉醇的含量，该方法操作简单高效，且对样品的预处理要求交低，无繁琐的预处理过程。