[发明专利]一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法

说明书

本发明公开了一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，首次从皱瘤海鞘中提取、分离和鉴别出化合物肌苷，能够对皱瘤海鞘进行充分回收利用，避免浪费；采用高速逆流色谱进行分离，具有样品无损失、无污染、高效、快速和分离量大的优点，具体分离步骤简单易操作；分离得到的肌苷在制药等领域具有广泛用途，对海洋天然产物有效成分的研究具有十分重要的意义。

技术领域

本发明涉及生物来源的新药物提取分离工艺技术领域，具体涉及一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，首次从皱瘤海鞘(Styela plicata)中提取、分离和鉴别出化合物肌苷。

背景技术

海鞘是尾索动物亚门海鞘纲的尾索动物，在自然界中已知有1500余种，主要分布在热带及亚热带海域。我国海鞘资源丰富，已记录的中国沿海海鞘种类有100余种，且有很多为我国所特有。一般而言，海鞘可为自珊瑚礁海域采集到的野生型﹝wild type﹞，亦可为经养殖得到的养殖型﹝cultured type﹞。据报道，海鞘中含有多种具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎等活性的化合物，因此，近年来，海鞘的化学成分及其生物活性成为了海洋天然产物研究的热门领域。

皱瘤海鞘(Styela plicata)是海鞘中的一种，主要分布于我国中南沿海的福建、广东和海南等，部分地区也有人工养殖。皱瘤海鞘经常在一些海产养殖过程中一同生长起来，虽然皱瘤海鞘在部分地区有作为食物食用的习惯，但大部分的皱瘤海鞘仍然是作为养殖过程中的副产物被丢弃掉，造成了大量的浪费。因此，如果能将皱瘤海鞘进行有效的利用，不仅具有一定的经济价值，也可以解决浪费问题。

肌苷(Inosine)，也称为次黄苷、次黄嘌呤核苷等，化学结构式如下式所示，分子式为C₁₀H₁₂N₄O₅，相对分子量为268。肌苷是由次黄嘌呤于核糖结合而成的核苷类化合物。在嘌呤的从头合成(de novo synthesis)中，肌苷酸(IMP)可以作为合成腺苷酸(AMP)和鸟苷酸(GMP)的前体。适用于各种原因引起的白细胞减少症、血小板减少症、各种心脏疾患、急性及慢性肝炎、肝硬化等，此外尚可治疗中心视网膜炎、视神经萎缩等。

目前尚未有研究揭示皱瘤海鞘中是否含有肌苷，更没有如何从皱瘤海鞘中获得肌苷的分离技术报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，包括：

1)取皱瘤海鞘，用正己醇浸提若干次，合并浸提液，浓缩得到粗提物；

2)步骤1)得到的粗提物用高速逆流液相色谱分离：溶剂体系为乙酸乙酯：甲醇：水＝4.5～5.5:0.8～1.2:4.5～5.5，充分混合后静置分层，然后分离上相与下相；所述粗提物用45～55％甲醇溶解为浓度680～700mg/mL进样，以上相为固定相，以下相为流动相，流速2～4mL/min，正接正转，转速800～900r/min；温度34～36℃；检测波长：205～215nm；收集55～83min出峰对应的组份；

3)取步骤2)中55～83min出峰对应的组份，用反相液相色谱分离：固定相：YMC-Triart C18；流动相：甲醇-水混合液；梯度洗脱1.5～2.5h，流动相中甲醇浓度从4～6％均匀递增到100％；流速55～65mL/min；柱温24～26℃；检测波长195～205nm、250～260nm、305～315nm；

4)收集步骤3)中流动相中甲醇浓度为13％～25％时对应的组份，用反相液相色谱分离：固定相：YMC-Triart C18；流动相：甲醇浓度为30～34％的甲醇-水混合液；等度洗脱；流速55～65mL/min；柱温24～26℃；检测波长210～220nm、250～260nm、330～340nm；