[发明专利]一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法

权利要求书

1.一种从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：包括：

1)取皱瘤海鞘，用正己醇浸提若干次，合并浸提液，浓缩得到粗提物；

2)步骤1)得到的粗提物用高速逆流液相色谱分离：溶剂体系为乙酸乙酯：甲醇：水＝4.5～5.5:0.8～1.2:4.5～5.5，充分混合后静置分层，然后分离上相与下相；所述粗提物用45～55％甲醇溶解为浓度680～700mg/mL进样，以上相为固定相，以下相为流动相，流速2～4mL/min，正接正转，转速800～900r/min；温度34～36℃；检测波长：205～215nm；收集55～83min出峰对应的组份；

3)取步骤2)中55～83min出峰对应的组份，用反相液相色谱分离：固定相：YMC-TriartC18；流动相：甲醇-水混合液；梯度洗脱1.5～2.5h，流动相中甲醇浓度从4～6％均匀递增到100％；流速55～65mL/min；柱温24～26℃；检测波长195～205nm、250～260nm、305～315nm；

4)收集步骤3)中流动相中甲醇浓度为13％～25％时对应的组份，用反相液相色谱分离：固定相：YMC-Triart C18；流动相：甲醇浓度为30～34％的甲醇-水混合液；等度洗脱；流速55～65mL/min；柱温24～26℃；检测波长210～220nm、250～260nm、330～340nm；

5)收集步骤4)中7～11min出峰对应的组份，用0.5～2％甲醇水配制成140～160mg/mL，用高效液相色谱分离：固定相：YMC-Triart C18；流动相：甲醇浓度为0.5～2％的甲醇-水混合液；等度洗脱；流速：8～12mL/min；柱温24～26℃；检测波长：195～205nm、245～255nm和255～265nm；收集66～75min出峰对应的组份，即为肌苷。

2.根据权利要求1所述的从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：所述步骤2)中，高速逆流液相色谱采用TBE-300B。

3.根据权利要求1所述的从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：所述步骤2)中，上样体积为14～16mL。

4.根据权利要求1所述的从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：所述步骤2)中，以上相为固定相，以下相为流动相，用35～45mL/min的流速将固定相泵满，调节转速为800～900r/min，温度34～36℃，以2～4mL/min的流速向柱中泵入流动相，当流动相从主机出口稳定流出时，证明体系已经达到流体动力学平衡；随后再用于粗提物的高速逆流液相色谱分离。

5.根据权利要求1所述的从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：所述步骤3)中，反相液相色谱采用4250，带有DAC-50动态轴向压缩柱系统；所述固定相YMC-Triart C18的规格为50×250mm，粒径10μm。

6.根据权利要求1所述的从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：所述步骤4)中，反相液相色谱采用4250，带有DAC-50动态轴向压缩柱系统；所述固定相YMC-Triart C18的规格为50×250mm，粒径10μm。

7.根据权利要求1所述的从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：所述步骤5)中，高效液相色谱采用岛津高效液相色谱仪制备系统LC-6AD；固定相YMC-Triart C18制备柱的规格为20×250mm，粒径5μm。

8.根据权利要求1所述的从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：所述步骤5)中，采用SPD-M20A二级管阵列检测器。

9.根据权利要求1所述的从皱瘤海鞘中分离肌苷的方法，其特征在于：所述步骤5)中，进样量280～320μL。