[发明专利]由血浆环状RNA组成的肝癌诊断标志物及诊断试剂盒

说明书

本发明涉及生物医学诊断技术领域，具体是一种由血浆环状RNA组成的肝细胞肝癌诊断标志物组合，以及含有该组合的试剂盒。所述肝癌诊断标记物包括如下环状RNAs：hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897。本发明可用于区分肝癌患者与健康人、慢性乙型肝炎患者或乙肝肝硬化患者。

技术领域

本发明涉及生物医学诊断技术领域，具体地说，是一个由血浆环状RNA组成的肝癌诊断组合，所述的血浆环状RNA包括hsa_circ_0000976、hsa_circ_0007750和hsa_circ_0139897，以及其用于原发性肝细胞肝癌预警以及早期诊断试剂盒的应用。

背景技术

早期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC，以下简称为肝癌)往往没有明显症状或仅表现为乏力、纳差、腹胀等非典型症状，当出现肝区疼痛、肝肿大等明显症状时，常常意味着已经到达中晚期，发生了肝内外转移，失去了根治性手术的机会。因此，对于慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、酒精性肝病以及非酒精性脂肪性肝病等肝癌高危患者，需定期(一般为3至6个月)监测肝癌的发生。目前常用的肝癌诊断方法有B超，CT(computedtomography)和磁共振(magnetic resonance imaging,MRI)等影像学检查以及甲胎蛋白(a-fetoprotein,AFP)，异常凝血酶原(又称PIVKA-II，protein induced by vitamin Kabsence or antagonists-II,维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白)等实验室检查。但影像学检查对于小肝癌的诊断仍不够准确。而甲胎蛋白和异常凝血酶原对肝癌诊断的敏感性和特异性也不够理想。既往文献表明，甲胎蛋白对肝癌诊断的敏感性为39-64％，特异性为76-91％，异常凝血酶原对肝癌诊断的敏感性为41-77％，特异性为72-98％。因此，有必要寻找新的肝癌诊断标志物。

环状RNA(Circular RNAs，简称为circRNAs)是一种闭合环状的单链RNA，既往被认为是一种罕见的RNA，并且仅仅是RNA剪切过程中产生的“废物”，没有任何功能。近年来，高通量测序发现包括人类在内的真核生物细胞中存在大量的环状RNA。重要的是，已有多篇文献报道环状RNA可以作为肿瘤诊断标志物。Li Yan等(LI Y,ZHENG Q,BAO C,etal.Circular RNA is enriched and stable in exosomes:a promising biomarker forcancer diagnosis[J].Cell research,2015,25(8):981-4)在健康人血清外泌体中检测出了1215个环状RNA，这些RNA丰度较高，并且将血清在常温放置24小时后，环状RNA几乎没有发生降解。结肠癌患者血清外泌体中circ-KLDHC10的表达水平高于健康对照。这些结果表明环状RNA可作为肿瘤诊断标志物。Yang Fan等(YANG F,LIU D Y,GUO J T,etal.Circular RNA circ-LDLRAD3 as a biomarker in diagnosis of pancreatic cancer[J].World journal of gastroenterology:WJG,2017,23(47):8345-54)发现环状RNAcirc-LDLRAD3在胰腺癌组织中的表达量高于癌旁(P0.01)，在胰腺癌患者外周血血浆中的表达量高于正常人(P0.01)，其对胰腺癌诊断的ROC曲线(receiver operatingcharacteristic curve，受试者工作特征曲线，简称ROC曲线)的AUC(Area Under Curve，曲线下面积)为0.67，敏感性为57.38％，特异性为70.49％；联合CA19-9后AUC为0.87，敏感性为70.49％，特异性为93.55％。Sun Handong等(SUN H,TANG W,RONG D,et al.Hsa_circ_0000520,a potential new circular RNA biomarker,is involved in gastriccarcinoma[J].Cancer biomarkers:section A of Disease markers,2018,21(2):299-306)发现环状RNA hsa_circ_0000520在胃癌患者血浆中的表达量低于正常人。Yin Wei-Bing等(YIN W B,YAN M G,FANG X,et al.Circulating circular RNA hsa_circ_0001785acts as a diagnostic biomarker for breast cancer detection[J].Clinicachimica acta；international journal of clinical chemistry,2017,12(3):25-30)发现环状RNA hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血浆中的表达量高于正常人，其诊断乳腺癌的AUC为0.784，而在同一队列中，CEA诊断乳腺癌的AUC为0.562，CA15-3诊断乳腺癌的AUC为0.629，其在乳腺癌手术前(0.283±0.043)血浆中的表达量高于手术后(0.109±0.037，P0.01)。Zhao Q等(ZHAO Q,CHEN S,LI T,et al.Clinical values of circular RNA0000181in the screening of gastric cancer[J].Journal of clinical laboratoryanalysis,2017,10(9):87-92)发现hsa_circ_0000181在胃癌患者外周血血浆中的表达量低于正常人(P0.001)，其低表达与分化(P＝0.038)及癌胚抗原(P＝0.037)有关，其AUC为0.756，其敏感性为99.0％，特异性为85.2％。