[发明专利]一种发酵生产长链二元酸的方法

权利要求书

1.一种发酵生产长链二元酸的方法，包括发酵过程，其特征在于，所述发酵过程采用带放发酵的方法。

2.如权利要求1所述的发酵生产长链二元酸的方法，其中，所述带放发酵的方法包括以下步骤：

a、在含发酵培养基的发酵罐中接入种子液，添加底物进行发酵，发酵至发酵液体积为罐容的60％～85％时；

b、放出部分发酵液，补加所述底物，或补加所述底物并同时补加无菌水和/或营养盐，至发酵液体积为罐容的60％～85％，继续发酵转化至所述底物浓度为0％～2％(v/v)；

c、结束发酵，或者重复前述b步骤1-5次后结束发酵。

3.如权利要求2所述的发酵生产长链二元酸的方法，所述放出部分发酵液是放出5％～20％(v/v)的所述发酵液；优选地，所述放出部分发酵液时，所述发酵液中底物浓度为0％～2％(v/v)。

4.如权利要求2-5任一项所述的发酵生产长链二元酸的方法，其中，在所述发酵方法中，将种子液接种到所述含有发酵培养基的发酵罐中，发酵过程控制温度28～32℃，通风量为0.3～0.7vvm，罐压为0.05～0.14MPa，所述罐压为表压，保持一定的搅拌速度以控制溶氧大于等于10％，补加碱液控制发酵液的pH值，发酵前期菌体生长时控制pH为3.5～6.5，随着微生物的生长，发酵液的pH逐步下降，控制pH大于等于3.0，发酵中后期转化时控制pH为5.0～8.5。

5.如权利要求4所述的发酵生产长链二元酸的方法，其中，还包括获得活化菌种化和获得种子液的过程；

所述获得活化菌种的过程包括：

取热带假丝酵母的甘油管菌种接种于装有YPD培养基的种子瓶中，pH自然，28～32℃下，200～250rpm、振幅26～50mm摇床培养1～2天；

所述获得种子液的过程包括：

取种子瓶种子接入装有种子培养基的种子罐中，接种后发酵体系的起始pH值为6.0～6.8，28～32℃下，通风量0.3～0.7vvm，罐压0.05～0.14MPa，保持一定的搅拌速度以控制种子培养过程的溶解氧大于等于10％，培养15～30h，培养成熟种子的标准为稀释30倍后OD₆₂₀为0.5～1.0。

6.如权利要求1-5任一项所述的发酵生产长链二元酸的方法，其中，所述发酵采用热带假丝酵母菌(Candida tropicalis)或清酒假丝酵母菌(Candida sake)。

7.如权利要求1-6任一项所述的发酵生产长链二元酸的方法，其中，所述底物为C9～C18的正烷烃、直链饱和脂肪酸、直链饱和脂肪酸酯和直链饱和脂肪酸盐中的一种。

8.如权利要求1-7任一项所述的发酵生产长链二元酸的方法，其中，所述长链二元酸为化学式HOOC(CH₂)nCOOH的二元酸，其中n≥7，包括但不限于：壬二酸、癸二酸、十一碳二元酸、十二碳二元酸、十三碳二元酸、十四碳二元酸、十五碳二元酸、十六碳二元酸、十七碳二元酸和十八碳二元酸中的一种或多种。