[发明专利]一种猪细小病毒的增殖方法

权利要求书

1.一种猪细小病毒的增殖方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）将猪细小病毒主代毒种，用不含胎牛血清的培养基稀释10~100倍，然后接种于ST细胞中，吸附0.5~1.5h，加入含1~3wt%胎牛血清的MEM培养基，进行细胞培养至90%~100%细胞出现病变；所述的不含胎牛血清的培养基为MEM培养基；

（2）反复冻融使宿主细胞破碎，离心去除细胞碎片，收集上清液；

（3）将所述的上清液、牛血清白蛋白、甘露醇或甘氨酸、L-精氨酸混匀得到混合液，然后将所述的混合液进行冷冻干燥；当所述混合液中含有甘露醇时，所述的牛血清白蛋白占所述的混合液总质量的1~2%，所述的甘露醇占所述的混合液总质量的1~3%，所述的L-精氨酸占所述的混合液总质量的0.5~3%；当所述混合液中含有甘氨酸时，所述的牛血清白蛋白占所述的混合液总质量的1%，所述的甘氨酸占所述的混合液总质量的1%，所述的L-精氨酸占所述的混合液总质量的0.5%；

（4）将冷冻干燥后的病毒用含1~3wt%胎牛血清的MEM培养基复溶至所述的上清液体积的5~15%的步骤。

2.根据权利要求1所述的猪细小病毒的增殖方法，其特征在于：当所述混合液中含有甘露醇时，所述的牛血清白蛋白占所述的混合液总质量的1.5~2%。

3.根据权利要求1所述的猪细小病毒的增殖方法，其特征在于：所述的甘露醇占所述的混合液总质量的2.5~3%。

4.根据权利要求1所述的猪细小病毒的增殖方法，其特征在于：当所述混合液中含有甘露醇时，所述的L-精氨酸占所述的混合液总质量的2.5~3%。

5.根据权利要求1所述的猪细小病毒的增殖方法，其特征在于：步骤（1）中，所述的ST细胞的制备方法为：将冻存的ST细胞复融后，取1mL细胞悬液逐滴滴加含8~12wt%胎牛血清的MEM培养基4~6mL，混匀后25℃、3000rpm、离心5min去除上清液，再补加含8~12wt%胎牛血清的MEM培养基8~12mL，摇匀，放入37℃、5%CO₂培养箱中孵育，待细胞生长至单层铺满整个细胞瓶底时用于病毒扩增及测定。