[发明专利]一种采用毛细管电泳-质谱联用分析鉴定落叶松中二氢槲皮素的方法

说明书

本发明提供了一种使用毛细管电泳‑质谱联用(CE‑MS)法检测落叶松中二氢槲皮素的方法。所述方法包括步骤为：(1)制备纯品二氢槲皮素的标准溶液，在毛细管电泳仪中进样，在质谱仪中分析，获得质谱图；(2)绘制标准曲线和计算最低检测限；(3)采用步骤(1)的方法获得样品的质谱图，计算样品加样回收率；(4)根据样品色谱峰与特征子离子信息，对落叶松中二氢槲皮素进行鉴定；(5)根据标准曲线对落叶松中二氢槲皮素进行定量分析。本发明具有操作简单、节约时间、检测高效、重复性好等特点，所需样品用量少，检测结果准确可靠，是一种对落叶松中二氢槲皮素进行定性、定量分析的优良方法。

技术领域

本发明涉及二氢槲皮素的鉴定方法，具体为采用毛细管电泳-质谱联用(CE-MS)建立的二氢槲皮素的分析鉴定方法。

背景技术

二氢槲皮素(Dihydroquercetin,DHQ),又称花旗松素(Taxifolin)、黄杉素、紫杉叶素,是二氢黄酮类化合物的一种，其结构式如下。在自然界中，二氢槲皮素的含量较低，但分布却较为广泛，如广泛存在于松科、金柳梅科、蔷薇科、漆树科、唇形科等植物中,其中在落叶松的根颈部含量最高。落叶松被离体后，其二氢槲皮素的含量随储存时间的增长而不断降低。

二氢槲皮素最初是由日本学者Fukui提取出来的一种葡萄糖苷元，分子式为C₁₅H₁₂O₇，分子量为304.25，是无色针尖状结晶(50％乙醇)或淡黄色粉末，熔点240℃，无特殊气味，几乎不能溶于苯等非极性溶剂，能稍溶于水，且易溶于极性溶剂(如乙醇、乙酸)、沸水中。

通常采用薄层扫描、分光光度计法和液相色谱法分析二氢槲皮素的含量，但薄层扫描和分光光度计法检测结果的准确性相对较低，导致两种方法在进行准确的定量分析中应用性不高。高效液相色谱法是现有检测方法中最为有效的方法，但依旧存在着分析成本高、样品使用量大、日常仪器维护费用贵，检测时间较长的缺点。

快速、精确、灵敏的新型鉴定方法仍为市场及科研所需要。毛细管电泳-质谱联用作为一种新兴的检测技术，利用了毛细管电泳具有的精密度高，样品用量小，分离速度快，单针样品测量费用低等特点，还具有质谱的定性能力强，能够给出分子局部的结构信息等特点，是多数检测标准中采用的仪器设备。将这一技术应用到二氢槲皮素的分析中，可以完善现有的检测鉴定方法。

发明内容

针对目前二氢槲皮素鉴定方法中分析成本高、样品使用量大，检测时间长的缺点，本发明提供了一种采用毛细管电泳-质谱联用的二氢槲皮素鉴定方法，能够高效、快速的鉴定落叶松中的二氢槲皮素。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种使用毛细管电泳-质谱联用法检测落叶松中二氢槲皮素的方法，所述方法包括的步骤为：

(1)制备纯品二氢槲皮素的标准溶液，在毛细管电泳仪中进样，获得所述纯品二氢槲皮素的质谱图；其中所述纯品二氢槲皮素以甲醇为溶剂，配制梯度浓度的二氢槲皮素标准溶液；所述在毛细管电泳中进样为20mbar进样2s，15-30kV条件下进行电泳，紫外波长选择214nm，柱温为20-35℃，缓冲盐为乙酸铵溶液；质谱条件为阳离子模式，MS/MS全扫描，氮气流速15psi，氦气7psi，气体温度为300℃，分离电压3.0kV，鞘流液使用50％的甲醇溶液(含0.01％醋酸铵)，流量为100nL/min,泵流速为0.4L/min，分流比为100:1；

(2)根据步骤(1)中质谱图的峰面积进行积分计算，绘制标准曲线和计算最低检测限；