[发明专利]一种基于蛋白质错误折叠的用于抗氧化药物筛选的细胞模型的构建方法

权利要求书

1.一种基于蛋白质错误折叠的用于抗氧化药物筛选的细胞模型在筛选抗氧化药物中的应用，其特征在于：所述细胞模型构建方法为：采用分子生物学基因重组技术构建荧光蛋白标记的野生和突变报告基因COMP基因慢病毒载体，在人胚肾293T细胞中包装病毒，转导HeLa细胞，嘌呤霉素筛选获得稳定表达COMP蛋白的细胞模型；

具体步骤如下：

（1）用携带抗生素抗性基因、报告基因、目的基因的慢病毒载体转染人胚肾293T细胞，获得抗性基因和报告基因的慢病毒颗粒；

（2）用步骤（1）获得的慢病毒颗粒感染人宫颈癌HeLa细胞，抗生素筛选获得细胞模型；

其中：所述慢病毒载体为HIV-1载体系统，包括三种质粒：表达报告基因的Plvx-IRES-Puro质粒、包装质粒psPAX2、包膜蛋白质粒pMD2.G，其中Plvx-IRES-Puro质粒含有嘌呤霉素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因，包装质粒psPAX2包含有HIV病毒的gag基因，包膜蛋白质粒pMD2.G包含有单纯疱疹来源的VSV-G基因；所述抗生素为嘌呤霉素；所述报告基因为eGFP-COMP融合基因；所述目的基因为野生型COMP基因和突变型COMP基因p.D401N；

所述细胞模型具体筛选评估抗氧化药物方法为：用抗氧化药物作用细胞模型，激发波长485 nm、发射波长530 nm 条件下检测eGFP的荧光强度，测定GFP含量，用细胞裂解液的吸光度与细胞培养基的吸光度的比值来表示COMP蛋白在细胞内的滞留情况，通过检测评估稳定表达野生型和突变型COMP基因的细胞模型中COMP蛋白的含量，评估抗氧化药物的效果；

所述抗氧化药物为乙酰水杨酸ASA和白藜芦醇Res。

2.根据权利要求1所述的一种基于蛋白质错误折叠的用于抗氧化药物筛选的细胞模型在筛选抗氧化药物中的应用，其特征在于：所述乙酰水杨酸的浓度为75 mM，白藜芦醇的浓度为100 μM，药物作用细胞模型的时间为24h。