[发明专利]一种PEG修饰的核酸适配体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种PEG修饰的的核酸适配体及其制备方法和应用。本发明针对GCRV核酸适配体进行PEG修饰，以不同的反应时间、反应比例不同分子量的PEG进行修饰而筛选出最佳的反应条件，并且不影响细胞活力并且对GCRV的感染有抑制作用。本发明修饰的GCRV的核酸适配体具有制备病毒性疾病治疗药物的应用前景，也具有制备GCRV分子探针、检测试剂的应用前景。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种PEG修饰的草鱼呼肠孤病毒的核酸适配体制备方法和作用。

背景技术

草鱼呼肠病毒(GCRV)引起的草鱼出血病，造成鱼体大量死亡，死亡率高达85％以上导致草鱼养殖业损失严重。草鱼出血病一旦爆发，目前没有有效抗病毒的治疗方法。因此，草鱼出血病成为草鱼养殖的一个瓶颈，严重制约了草鱼的养殖。

适配体(Aptamer)是一种经体外筛选技术得到的寡核苷酸序列(RNA或DNA)，与相应的配体有严格的识别能力和高度的亲和力。适配体具有高特异性、靶分子广、易于体外合成等优点，在基础研究、临床诊断和治疗中显示了广阔的应用前景。但是，没有修饰的适配体在体内很快降解，对其在实验中发挥作用有很大影响。

发明内容

本发明目的之一在于提供一种PEG修饰的核酸适配体。

本发明目的另一在于提供一种PEG修饰的核酸适配体制备方法。

本发明目的再一在于提供一种PEG修饰的核酸适配体的应用。

本发明所采取的技术方案是：

一种PEG修饰的核酸适配体制备方法，步骤如下所示：

1)将PEG、EDC·HCl以及NHS混合后振荡；

2)将核酸适配体先加到pH为4～7的MES缓冲液中，再加到步骤1)制备的混合液，

振荡2～5h后，即得PEG修饰的核酸适配体。

进一步的，步骤1)所述的PEG：EDC·HCl：NHS的摩尔比为2～6：2～6：1。

进一步的，步骤1)所述的振荡在60～100rpm的速度下震荡反应10～25min。

进一步的，步骤2)所述的振荡在60～100rpm的速度下震荡反应2～5h。

进一步的，步骤2)所述的PEG、核酸适配体和MES缓冲液的体积比为1:10～100：1。

进一步的，所述的核酸适配体为草鱼呼肠孤病毒的核酸适配体。

上述任一项所述的方法制备的PEG修饰的核酸适配体。

进一步的，所述的PEG修饰的核酸适配体为PEG修饰的草鱼呼肠孤病毒核酸适配体。

上述所述PEG修饰的核酸适配体在制备预防和/或治疗草鱼呼肠孤病毒试剂盒中的应用。

进一步的，所述的PEG修饰的核酸适配体为草原呼肠孤病毒的PEG修饰的核酸适配体。

本发明的有益效果是：

本发明制备的PEG修饰的GCRV核酸适配体，以不同的反应时间、反应比例不同分子量的PEG进行修饰而筛选出最佳的反应条件，稳定性好并且不影响细胞活力，并且对GCRV的感染有抑制作用，具有制备病毒性疾病治疗药物的应用前景，也具有制备GCRV分子探针、检测试剂的应用前景。

附图说明

图1为本发明PEG-核酸适配体的凝胶电泳图，1DNA marker；2PEG修饰核酸适配体于80rpm反应4h；3PEG修饰核酸适配体于80rpm反应30min；4核酸适配体。