[发明专利]一种合成次黄嘌呤的重组菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201810687117.X | 申请日： | 2018-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN110656074B | 公开（公告）日： | 2022-06-28 |
| 发明（设计）人： | 赵广;刘敏;咸漠;高文杰 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P19/40;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 邓宇 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 合成 次黄嘌呤 重组 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种合成次黄嘌呤的重组菌，其特征在于，该重组菌是以大肠杆菌为出发菌株，分别敲除大肠杆菌基因组上的转录阻遏蛋白基因purR、磷酸葡萄糖酸脱水酶基因edd、腺苷酸琥珀酸合成酶基因purA和次黄苷酸脱氢酶基因guaB，并且过表达D128A突变的PRPP合成酶基因prs和K326Q、P410W双突变的PRPP转酰胺酶基因purF。
2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述转录阻遏蛋白基因purR在 NCBI中的Gene ID为945226；所述磷酸葡萄糖酸脱水酶基因edd在 NCBI中的Gene ID为946362；所述腺苷酸琥珀酸合成酶基因purA在 NCBI中的Gene ID为948695；所述次黄苷酸脱氢酶基因guaB在 NCBI中的Gene ID为946985；所述D128A突变的PRPP合成酶基因prs的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述K326Q、P410W双突变的PRPP转酰胺酶基因purF的核苷酸序列如SEQID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，以大肠杆菌W3110为出发菌株。
4.一种权利要求1-3任一所述重组菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)以大肠杆菌W3110为出发菌株，分别敲除大肠杆菌W3110基因组的转录阻遏蛋白基因purR、磷酸葡萄糖酸脱水酶基因edd、腺苷酸琥珀酸合成酶基因purA和次黄苷酸脱氢酶基因guaB，获得突变菌株W3110△purR△edd△purA△guaB；
2)利用片段搭桥法分别克隆获得D128A突变的PRPP合成酶基因prs和K326Q、P410W双突变的PRPP转酰胺酶purF；所述D128A突变的PRPP合成酶基因prs的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示；所述K326Q、P410W双突变的PRPP转酰胺酶基因purF的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
3)将步骤2)所得的PRPP转酰胺酶基因purF连接到质粒载体，获得重组质粒I；
4)将步骤2)所得的PRPP合成酶基因prs连接到重组质粒I上，获得重组质粒II；
5)将步骤4)所得的重组质粒II导入步骤1)所得突变菌株，获得重组菌。
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