[发明专利]一种镉离子切割型通用隔断超快扩增可视化传感器

权利要求书

1.一种镉离子切割型通用隔断扩增可视化传感器，其特征在于，包括：(1)切割体系，(2)sPCR扩增体系，(3)包含ABTS显色液的检测体系；

所述检测体系用于对待测样品依次经由所述切割体系、sPCR扩增体系进行反应后所得产物进行显色检测；所述检测体系包括：酶活缓冲液和氯高铁血红素溶液，其中酶活缓冲液中含有K⁺；

其中，所述切割体系包括底物链和酶链：

底物链：5′-CTCACTATA rG—GAAGAGATG-3′

酶链：5′-CATCTCATCTAACAGCGTTCCGAAATAGC-3′

其中，rG表示核糖核酸；-表示镉离子切割位点；

所述sPCR扩增体系包括：正向隔断引物、反向引物、模板：

正向隔断引物：5′-GTGGGTAGGGCGGGTTGG-隔断物-CCAACCCGCCCTACCCACTCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3′

反向引物：5′-GAAGAGATG-3′

模板：5′-TCATCGCACCGTCAAAGGAACCTCAGTATCAGTGCTATACGTCGATCAGTACCCCAATTTCGCCATCTTCCCCCACGCACACATCTCTTC-3′。

2.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于，所述正向隔断引物中的隔断物为聚六乙二醇。

3.权利要求1或2所述传感器在检测镉离子方面中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测为定性检测或定量检测。

5.利用权利要求1或2所述传感器对镉离子进行定性检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、向所述切割体系中加入待测样品，进行切割反应；

S2、将S1所得切割产物加入所述sPCR扩增体系中进行聚合酶链式反应，得sPCR产物；

S3、利用所述检测体系对所述sPCR产物进行检测。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，S1具体如下：将底物链与酶链按等摩尔比例混合，用缓冲液稀释至浓度1μM-2μM，85℃-95℃加热15min，然后降温至25-37℃，得到核酶液；向35μL所述核酶液中加入待测样品溶液，形成40μL体系，于36-38℃孵育4-6min，然后加入4-6μL终止液，得到切割产物。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述检测体系包括酶活缓冲液和氯高铁血红素稀释溶液，将酶活缓冲液、氯高铁血红素稀释溶液和sPCR产物按体积比为8:1:1混匀，在35-38℃条件下反应20-40min，加入与前述混合物等体积的ABTS显色液，混匀，35-38℃避光孵育，肉眼进行监测。

8.利用权利要求1或2所述传感器对镉离子进行定量检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

SI、制作标准曲线：

利用已知浓度的镉离子溶液，构建具有不同镉离子浓度的切割体系，sPCR扩增与检测步骤与权利要求5中的步骤相同；

以镉离子浓度为横坐标，以OD₄₁₅值为纵坐标，绘制标准曲线；

SII、按照权利要求5所述的方法对待测样品进行检测，将测得的OD₄₁₅值代入标准曲线，计算得到待测样品中镉离子的含量，实现对镉离子的定量检测。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述不同镉离子浓度的浓度区间为1-600nM。