[发明专利]增加同种异体T细胞移植相容性的方法及其应用

权利要求书

1.一种增加同种异体T细胞移植相容性的方法，所述方法包括：

步骤1)：从人血中提取PBMC并激活T细胞；

步骤2)：B2M-HLA-E融合基因的病毒转导；

步骤3)：B2M基因剪切；

步骤4)：T细胞培养扩增，分选HLA-ABC阴性T细胞；

其中所述B2M-HLA-E融合基因从5’端到3’端包括：

(a)B2M信号区DNA、提呈多肽DNA、接头DNA、B2M基因、接头DNA、HLA-E基因；或

(b)B2M信号区DNA、B2M基因、接头DNA、HLA-E基因。

2.一种增加同种异体T细胞移植相容性的方法，所述方法包括：

步骤1)：从人血中提取PBMC并激活T细胞；

步骤2)：B2M基因剪切；

步骤3)：B2M-HLA-E融合基因同源重组修复模板导入；

步骤4)：B2M-HLA-E融合基因敲入B2M基因组位点；

步骤5)：T细胞培养扩增，分选HLA-ABC阴性T细胞；

其中所述B2M-HLA-E融合基因从5’端到3’端包括：

(a)B2M信号区DNA、提呈多肽DNA、接头DNA、B2M基因、接头DNA、HLA-E基因；或

(b)B2M信号区DNA、B2M基因、接头DNA、HLA-E基因。

3.一种增加同种异体T细胞移植相容性的方法，所述方法包括：

步骤1)：从人血中提取PBMC并激活T细胞；

步骤2)：B2M-HLA-E融合基因同源重组修复模板导入；

步骤3)：B2M基因剪切；

步骤4)：B2M-HLA-E融合基因敲入B2M基因组位点；

步骤5)：T细胞培养扩增，分选HLA-ABC阴性T细胞；

其中所述B2M-HLA-E融合基因从5’端到3’端包括：

(a)B2M信号区DNA、提呈多肽DNA、接头DNA、B2M基因、接头DNA、HLA-E基因；或

(b)B2M信号区DNA、B2M基因、接头DNA、HLA-E基因。

4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其中B2M信号区DNA如SEQ ID NO:1所示。

5.根据权利要求1、2或3所述的方法，其中提呈的多肽包括VN₂APRTN₇N₈L，N₂为除了苏氨酸以外的氨基酸，N₇为缬氨酸或亮氨酸、N₈为缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸，其优选多肽序列如SEQ ID NO:2所示，并且相应的DNA序列如SEQ ID NO:3所示。

6.根据权利要求1、2或3所述的方法，其中接头多肽序列如SEQ ID NO:4或5所示，并且相应的DNA序列如SEQ ID NO:6或7所示。

7.根据权利要求1、2或3所述的方法，其中B2M基因序列如SEQ ID NO:8所示。

8.根据权利要求1、2或3所述的方法，其中HLA-E基因包括如下形式：HLA-E*0101、HLA-E*0102、HLA-E*0103和HLA-E*0104，优选HLA-E*0103，DNA序列如SEQ ID NO:9所示。

9.根据权利要求1、2或3所述的方法，其中(a)中的B2M-HLA-E融合基因的DNA序列如SEQID NO:10所示，并且(b)中的DNA序列如SEQ ID NO:11所示。

10.根据权利要求1所述的方法，其中将所述B2M-HLA-E融合基因单独包装成一个病毒或者通过T2A、IRES或P2A剪切肽段与其它基因融合并包装成一个病毒，最后转导入T细胞中，其中所述病毒为慢病毒或逆转录病毒。