[发明专利]靶向CLL-1嵌合抗原受体及其用途

说明书

本发明涉及靶向CLL‑1的嵌合抗原受体及其用途。具体而言，本发明提供一种多核苷酸序列，选自：(1)含有依次连接的抗CLL‑1单链抗体的编码序列、人CD8铰链区的编码序列、人CD8跨膜区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列和任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列的多核苷酸序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。本发明还提供相关的融合蛋白、含所述编码序列的载体，以及所述融合蛋白、编码序列、载体的用途。本发明制备的CLL‑1‑BBz‑tEGFR CAR‑T细胞对特异性肿瘤细胞具强烈的杀伤功能，CD107a表达和IFNγ分泌较高，效靶比是5:1的情况下对靶细胞杀伤效率都高于70％左右。

技术领域

本发明属于细胞治疗领域，具体涉及靶向CLL-1的嵌合抗原受体及其用途。

背景技术

嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)T细胞是指 经基因修饰后，能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的 T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、 放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段。CAR-T 细胞回输治疗是当前肿瘤治疗中最明确有效的免疫治疗形式。大量研究表明， CAR-T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，显著改善 患者的生存状况。

嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件，赋予T细胞HLA非依赖的方式识 别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体 TCR能够识别更广泛的目标。CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原 (tumor-associated antigen，TAA)结合区(通常来源于单克隆抗体抗原结合 区域的scFV段)，一个胞外铰链区，一个跨膜区和一个胞内信号区。目标抗原 的选择对于CAR的特异性、有效性以及基因改造T细胞自身的安全性来讲都是关 键的决定因素。

AML是成年人最常见的急性白血病，随着年龄的增长，其发病率也增加， 具有发病急、病程进展快、死亡率高等特点，在临床表现和治疗反应上具有 异质性。随着化疗方案的完善，AML患者的生存率已有明显改善，但仍有一 部分人不能达到缓解甚至后期复发，5年无病生存率只有25％至35％，而60 岁以上患者甚至更低。尽管应用高剂量的化疗，只有30％至40％的患者急性 髓系白血病(AML)得以生存，主要原因为AML是一个干细胞的恶性克隆性疾病， AML复发的根源在于残存的LSC。研究表明，CD34+细胞数大于1％时，AML的LSC存在于CD34+CD38-部分。体外实验证明这些干细胞在化疗耐药中起重要 作用，而区分体内残留的恶性的CD34+CD38-细胞是有难度的，这最终会导致 疾病的复发。此外，早期发现LSC，会为患者提供预后评估和疾病复发预测 的价值。

CD19CART在治疗急性淋巴白血病方面取得了很好的效果，但CART细胞治 疗AML目前还没有看到惊人的效果，一个主要原因是因为很多针对AML的抗原 在正常细胞和恶性肿瘤细胞表达水平相似，那么靶向AML的CART细胞在清除 白血病细胞的同时也会伤害骨髓细胞包括正常的骨髓组织和骨髓祖细胞，即 大家都不想看到的脱靶效应“on target,offtumor”。一些靶点Lewis Y,CD33, 和CD123已经用于治疗髓系白血病的临床试验，但还没有持续缓解案例报道。目 前，急需一种新靶点的cart细胞来治疗髓系白血病。