[发明专利]一种花椰菜内参基因及其应用

说明书

本发明提供一种花椰菜内参基因及其应用，属于分子生物学领域，所述基因序列如SEQ ID NO.1所示。用于制备所述基因的克隆引物为：BoACT‑F：CCAATCATACTCAAAAGAAGAGTT；BoACT‑R：AGGATTCAATCCAGCCACAGGTT。该基因可作为花椰菜的内参基因用于荧光定量PCR中标定其他新基因。寻找合适稳定的花椰菜内参基因，对提高荧光定量PCR实验的重复性、稳定性和实验数据的可靠性意义重大，对锚定花椰菜新基因，相关基因功能的表达分析将起到不可估量的作用。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种花椰菜内参基因及其应用。

背景技术

近年来，随着分子生物学的飞速发展，基因组学研究进入一个新阶段，挖掘新基因，明确其生物学功能和在有机体代谢过程中的调控机理是科研工作者的重要任务。实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qRT-PCR），是一种反应灵敏度高、特异性强、重复性好的新型核酸定量技术，是在普通PCR基础上发展起来研究有机体中不同组织基因表达的重要生物学手段之一。实时荧光定量PCR实验获得的数据，容易受到PCR 扩增效率、逆转录、RNA 质量及cDNA 合成等因素的影响，使得获得的数据和检测基因的真实数据有所偏差。为了解决这个关键问题，内参基因作为校正和标准化数据，被应用到实际操作中，以减小样品数据的误差。一般来说，理想的内参基因是在不同的RNA提取方法下、在有机体的不同器官、不同的发育时期都能稳定表达的一类看家基因。常见的内参基因包括微管蛋白基因(tubulin，TUB) 、泛素基因（ubiquitin，UBQ）、肌动蛋白基因（actin，ACT）、甘油醛－3－磷酸－脱氢酶基因(glyceraldehyde- 3- phosphate dehydrogenase，GAPDH) 等。acitn作为细胞骨架蛋白分子存在与高等植物有机体中，它在细胞进化过程中是高度保守的一种重要蛋白。actin 在有机体内不同的器官和组织，病理或生理状态下都持续恒量表达，并能高水平表达，且易于被引物扩增，具有高度保守性。因此，actin基因常常作为内参基因被广泛应用于植物的基因表达研究中。

花椰菜 (Brassica oleracea L. var. botrytis L.)原产于地中海沿岸，19世纪传入我国南方地区， 是十字花科芸薹属甘蓝种中的变种，以花球为食用器官，在南方福建、浙江、江苏等地均有栽培。花椰菜富含蛋白质、脂肪、碳水化合物、食物纤维、矿物质等营养成分，有很高的食用价值。此外，它还含有类黄酮化合物、硫代葡萄糖苷、黑子芥酶等多种生物活性成分。花椰菜作为药食兼用的蔬菜深受消费者喜爱。随着生物技术发展的日新月异，科研工作者对花椰菜基因组学方面的研究不断深入，基因表达分析是其中必不可少的研究项目之一。目前，还未见关于花椰菜内参基因的使用和筛选的报道，也没有关于花椰菜BoACT 的克隆及其作为内参基因的研究。本发明克隆了花椰菜 BoACT 基因作为内参基因，为攻克花椰菜实时荧光定量 PCR 检测中无内参基因的难题，在此基础上设计了1对实时荧光定量 PCR 引物，旨在为开展花椰菜重要功能基因的挖掘、表达模式以及调控机理的研究有重要的理论意义和实践价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种花椰菜内参基因及其应用，对开展花椰菜重要功能基因的挖掘、表达模式以及调控机理的研究有重要的理论意义和实践价值。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种花椰菜内参基因及其应用，所述基因序列如SEQ ID NO.1所示。用于制备所述基因的克隆引物，所述引物序列为：

BoACT-F：CCAATCATACTCAAAAGAAGAGTT；

BoACT-R：AGGATTCAATCCAGCCACAGGTT。