[发明专利]一种丁香疫霉菌的LAMP检测引物组合物及其LAMP检测试剂盒和LAMP检测方法在审
| 申请号： | 201810599786.1 | 申请日： | 2018-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN108588265A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 戴婷婷;焦彬彬;郑香荣;李中言;王明远 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丁香 引物组合物 疫霉菌 疫霉 检测 环介导等温扩增检测 反向内引物 反向外引物 正向内引物 正向外引物 高灵敏度 恒温扩增 技术平台 快速检测 特异性强 重要意义 农药 病原物 检疫性 可用 侵染 病害 疫病 水果 | ||
1.一种用于检测丁香疫霉的环介导等温扩增引物组合物，其特征在于：由正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3组成；各引物序列具体如下：
FIP：5＇-GCCGCGGTAGTAGCTGCTAGT-TTGTAGTGGGACACGGCT-3′；
BIP：5＇-CGTGGTGTACGACGTGACGG-CGACGCACCTATCAATCTCG-3＇；
F3：5＇-CTGTAGAGCATGCTGCTGAT-3＇；
B3：5＇-CCCGCAGAGAAACCTATGG-3＇。
2.权利要求1所述的环介导等温扩增引物组合物在检测丁香疫霉中的应用。
3.一种检测丁香疫霉的环介导等温扩增试剂盒，其特征在于：包含体积为一次用量以上的检测溶液，其中，1mL的检测溶液包括：48mM dNTPs、0.8M Tris-HC、0.4mM KCl、0.4mM(NH4)2SO4、0.24mM MgSO4、4％Triton X-100、Bst DNA polymerase 320单位，200mM羟基萘酚蓝、32mM正向内引物FIP、32mM反向内引物BIP、8mM正向外引物F3、8mM反向外引物B3；其中，各引物序列具体如下：
FIP：5′-GCCGCGGTAGTAGCTGCTAGT-TTGTAGTGGGACACGGCT-3＇；
BIP：5＇-CGTGGTGTACGACGTGACGG-CGACGCACCTATCAATCTCG-3＇；
F3：5＇-CTGTAGAGCATGCTGCTGAT-3＇；
B3：5′-CCCGCAGAGAAACCTATGG-3＇。
4.权利要求3所述的检测丁香疫霉的环介导等温扩增试剂盒在检测丁香疫霉中的应用。
5.一种检测丁香疫霉的方法，其特征在于：提取待检微生物的DNA，以提取的DNA为模板，利用权利要求1所述的环介导等温扩增引物组合物或权利要求3所述的环介导等温扩增试剂盒进行环介导等温扩增；观察环介导等温扩增反应溶液颜色变化，天蓝色表示检测为阳性，存在丁香疫霉；紫色表示检测结果为阴性，不存在丁香疫霉。
6.根据权利要求5所述的检测丁香疫霉的方法，其特征在于：提取待检微生物的DNA，取2μL DNA溶液，加入23μL环介导等温扩增试剂盒中的检测溶液进行环介导等温扩增，环介导等温扩增反应程序为：64℃，60min，扩增产物进行颜色变化的观察。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京林业大学，未经南京林业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810599786.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
