[发明专利]诊断脂质代谢相关疾病或阿尔茨海默病标志物的方法

说明书

本发明涉及诊断脂质代谢相关疾病或阿尔茨海默病标志物载脂蛋白E的方法。本发明提供了检测APOE基因多态性的检测试剂和检测方法，解决了现有技术的测序结果中存在较高比例的等位基因非特异性交叉扩增的技术问题。

技术领域

本发明属于诊断领域，更具体地，本发明涉及诊断冠心病或心肌梗塞相关标志物的方法；尤其涉及一种载脂蛋白E(APOE)基因两个SNP位点rs429358和rs7412的多态性检测试剂盒。

背景技术

载脂蛋白E基因编码载脂蛋白E前体(Apolipoprotein E，ApoE)，含有317个氨基酸残基，经过加工后的载脂蛋白E包含299个氨基酸残基，分子量为34.2KD，是一种具有脂蛋白转运、代谢、修复细胞膜、神经发育、修复损伤等多种功能的脂质转运蛋白。ApoE与多种心脑血管疾病密切相关，参与高血脂症、动脉粥样硬化、冠心病等心脑血管疾病的整个发生发展过程，ApoE基因多态性是这些疾病早期及发展过程中个体差异的主要原因。其遗传多态性主要受控于两个SNP位点rs429358和rs7412，这两个SNP位点通过不同的核酸组合决定了ApoE的三种等位基因型：ε2(rs429358为T，rs7412为T)、ε3(rs429358为T，rs7412为C)、ε4(rs429358为C，rs7412为C)，这三种类型等位基因分别编码三种ApoE蛋白亚型，即ApoE2(其蛋白序列的112位和158位均为半胱氨酸)、ApoE3(其蛋白序列的112位为半胱氨酸，158位为精氨酸)、ApoE4(其蛋白序列的112位和158位均为精氨酸)。因此，ApoE基因有ε2/ε2、ε3/ε3、和ε4/ε4三种纯合子型与ε2/ε3、ε2/ε4和ε3/ε4三种杂合子型。自然人群中，基因频率ε3分布最高，ApoE3/3(即ε3/ε3)表型分布约70％。ApoE基因具有异构体特异性，即不同基因编码的蛋白质功能具有差异性，从而导致不同蛋白质对脂质的代谢能力不同、抗氧化及抗炎症能力不同。

ApoE基因多态性是冠心病(CHD)早期及发展过程中个体差异的主要原因，通过ApoE基因多态性的检测可以了解个体CHD及心肌梗塞(MI)的易感性。ApoE2的作用是降低胆固醇浓度，对冠状动脉硬化的发展有一定的防护作用，而ApoE 4则会使血浆LDL-C、TC浓度升高，易诱发CHD及MI。

ApoE基因是目前已知的阿尔茨海默病最密切的遗传标志物，ApoE4携带者阿尔茨海默病的易感性增加。ApoE突变后，其与LDL-R的亲和力发生改变。携带一个E4等位基因的个体其发展为AD的可能性高于无E4等位基因的个体约3-4倍。E4等位基因在普通人群中比例大约为15％，而在AD患者中的比例可达40％。ApoE4是AD的重要危险因素。通过检测ApoE的基因型，可了解是否为AD易感人群，继而从病因学延缓AD的发生、发展；并定期检查，以便早诊断、早治疗、最大程度的降低疾病造成的损害。

目前对基因突变和基因多态性的检测，常见有直接测序法、基因芯片杂交法、PCRRFLP方法、PCR扩增产物毛细管电泳分析法、PCR-SSCP、PCR高分辨熔解曲线分析技术、PCRTaqman MGB(Minor Groove Binder)探针法、AS-PCR法、Cast-PCR法等。这些方法或多或少存在着仪器价格高，操作难度大，存在一定假阴性和假阳性，检测成本高，临床普及程度低，不能同时大规模检测临床标本等缺点，需要加以改进和优化。

本领域中，多数的遗传标记物以检测组织样本或血液样本为主，较少地采用口腔上皮细胞样本。获取口腔上皮细胞作为样本来进行检查，虽然取样简单、对患者无痛苦，但是相比于血清检测，其一次取样获得的DNA样本量少、样本背景复杂，对于检测的精密度，检测试剂的敏感性的要求显著更高，因此本领域中对于疾病检测以获取口腔上皮细胞(例如以唾液拭子来获取)作为检测样本的情形少之又少，成功开发出成熟的诊断试剂的也很少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种载脂蛋白E(APOE)基因的多态性检测试剂盒。

在本发明的第一方面，提供检测载脂蛋白E基因多态性的试剂，所述的试剂包括：