[发明专利]携带GITR共刺激信号靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞

说明书

本发明涉及一种嵌合抗原受体融合蛋白，其从N端到C端包含：(i)包含VH和VL的单链可变区片段(scFv)，其中scFv对人表皮生长因子受体(EGFR)具有低亲和力，解离常数(K_D)＞50nM(ii)跨膜结构域，(iii)GITR共刺激结构域，和(iv)激活域。

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗技术领域，更具体地涉及携带GITR共刺激信号靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞，其可以有效攻击过表达EGFR的肿瘤细胞而不会攻击EGFR阴性的肿瘤细胞。

背景技术

免疫治疗是一种新兴的非常有前景的治疗癌症的方法。T细胞或T淋巴细胞是免疫系统的有效武器，它们能够持续性地搜寻外来抗原并从正常细胞中或非正常细胞，如癌症或被感染的细胞。基因修饰的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)是设计肿瘤特异性T细胞的常见方案。将靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR-T细胞输入患者(称为过继细胞转移或ACT)，代表了一种有效的免疫治疗方法。与化疗或抗体技术相比，CAR-T技术的优点在于重编程的T细胞可以在患者体内增殖并持续存在(“活的药物”)。

CAR(嵌合抗原受体)通常是由一个单克隆抗体衍生的单链可变区片段(scFv)通过铰链和跨膜结构域连接到可变数目的胞内信号结构域：(i)单个细胞活化的CD3-ζ结构域；(ii)和CD3-ζ结构域相连的CD28，CD137(4-1BB)或其他共刺激域(也可用CD27信号结构域代替CD28或CD137结构域)。CAR的发展从第一代(没有共刺激域)到第二代(具有一个共刺激域)到第三代CAR(具有多个共刺激域)。生成的具有多个共刺激域的CAR(即所谓的第三代CAR)会产生增加的细胞溶解活性，并显着改善CAR-T细胞的持续性，表现出增强的抗肿瘤活性。

然而，目前嵌合抗原受体的研究还有很多不足，还存在复发率高、安全性低等问题。因此，本领域迫切需要开发特异性好、疗效稳定、副作用小的嵌合抗原受体。

发明内容

本发明的目的在于提供一种携带GITR共刺激信号靶向EGFR的嵌合抗原受体T细胞。

在本发明的第一方面，提供了一种嵌合抗原受体融合蛋白，所述的融合蛋白从N-末端到C-末端包含：

(i)包含V_H和V_L的单链可变区片段(scFv)，其中scFv对人表皮生长因子受体(EGFR)具有低亲和力，解离常数(K_D)＞50nM,

(ii)跨膜结构域，

(iii)GITR共刺激结构域，和

(iv)激活结构域。

在另一优选例中，所述的scFv来源于C10抗体，并具有SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，或其至少90％的序列同一性。

在另一优选例中，所述的scFv来源于P3-5抗体，并且具有其至少90％的序列同一性。

在另一优选例中，所述的激活结构域是CD3ζ。

在另一优选例中，所述的CAR具有下式I结构：

L-scFv-H-TM-C-CD3ζ (I)

式中，

各“-”独立地为连接肽或肽键；

L为任选的信号肽序列；

scFv为对人表皮生长因子受体(EGFR)具有低亲和力，解离常数(K_D)＞50nM的单链抗体；

H为任选的铰链区；

TM为跨膜结构域；

C为GITR共刺激结构域；