[发明专利]用于检测人细胞色素P450相关基因多态性的引物组、试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开一种用于检测人细胞色素P450相关基因多态性的引物组，所述引物组包括针对CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP3A4*18、CYP2C9*3、CYP2D6*10及CYP3A5*3基因位点的特异性引物及探针；本发明还涉及一种用于人细胞色素P450相关基因多态性位点检测的试剂盒，所述试剂盒包括含有上述引物及探针的PCR反应液冻干粉(PCR buffer、dNTPs、MgCl2、UNG酶及Taq酶、海藻糖)。本发明还涉及一种用于人细胞色素P450相关基因多态性位点检测的方法，该方法免去抽提DNA程序，直接采用微量全血扩增，用血量少，减少病人的痛苦；省时省力，并且大大减少经济支出。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种用于检测人细胞色素P450 相关的基因多态位点的引物组、试剂盒及其检测方法。

背景技术

药物进入人体后，会经过吸收、分布、代谢、排泄四个过程。肝脏 是人体中代谢药物最重要的脏器，而主要的代谢酶是细胞色素P450超家 族(CYP)，它们催化多种内、外源物质(包括大多数临床药物)的代 谢，参与人体内一半以上的药物代谢过程。由单个核苷酸变异引起的 DNA序列多态性称之为单核苷酸多态性。P450代谢酶的单核苷酸多态 性是导致人类代谢和反应差异的关键因素。P450酶系的基因主要有 CYP1、CYP2、CYP3三个家族，相关的有以下几种重要的P450酶： CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4、CYP3A5。

CYP2C19参与氯吡格雷、S-美芬妥英、奥美拉唑、伏立康唑、安定、 去甲安定等药物的代谢。CYP2C19遗传变异可导致酶活性的个体差异， 使人群出现超快代谢者(ultrarapidmetabolizer，UM)、快代谢者(extensive metabolizer，EM)、中间代谢者(intermediatemetabolizer，IM)和慢代 谢者(poor metabolizer，PM)4种表型。CYP2C19*2(rs4244285，c.681G>A) 和CYP2C19*3(rs4986893，c.636G>A)是中国人群中存在的2种导致 CYP2C19酶缺陷的主要等位基因。CYP2C19*2导致剪接缺失， CYP2C19*3为终止密码子突变。EM个体只携带CYP2C19*1等位基因，IM个体携带CYP2C19*2或CYP2C19*3杂合子基因型；PM个体包括CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3和CYP2C19*3/*3基因型。东方人群中 75～85％的PM由CYP2C19*2所致，约20～25％的PM由CYP2C19*3 所致。

CYP2D6又称异喹胍4’-羟化酶,CYP第二亚家族中的重要成员。人 群中CYP2D6的活性呈现强代谢者(EM)、中间代谢者(IM)、弱代 谢者(PM)和超强代谢者(UM)四态分布的现象。白种人群中CYP2D6 PM的发生率高达5～10％，而在东方人群中PM的发生率约为1％。目前 已发现了CYP2D6基因的70多种遗传变异。不同突变类型对酶活性和药 物代谢的影响不一。中国人群中CYP2D6常见的导致酶活性降低的等位 基因包括CYP2D6*3(A2637deletion)、CYP2D6*4(G1934A)、CYP2D6*5 (CYP2D6deletion)和CYP2D6*10(C188T)，等位基因频率分别为1 ％、1％、6％和53％。其中，CYP2D6*5为基因缺失多态，导致PM表 型；CYP2D6*10为该酶第34位脯氨酸被丝氨酸所替代所致，导致IM表 型。导致CYP2D6酶活性缺失的多态性可影响安替比林、可待因、β受 体阻滞剂如美托洛尔和卡维地洛、氯丙咪嗪、去甲替林、地昔帕明、多 虑平、丙咪嗪、马普替林、奥匹哌醇、三甲丙咪嗪、昂丹司琼、曲马多和他莫昔芬等的体内代谢，从而影响这些药物的疗效和不良反应的发生， 临床需根据个体的基因型进行剂量的调整。