[发明专利]一种锦葵素-3-O-阿拉伯糖苷的分离纯化方法及其应用

说明书

本发明公开了一种锦葵素‑3‑O‑阿拉伯糖苷的分离纯化方法及其在制备α‑葡萄糖苷酶抑制剂中的应用，该分离纯化方法包括粗提、大孔树脂吸附、高速逆流色谱分离及固相萃取纯化，通过将高速逆流色谱与固相萃取技术相结合，再通过对工艺参数的优化，从花色苷组成复杂的蓝莓原料中分离制备得到高纯度的锦葵素‑3‑O‑阿拉伯糖苷单体；经活性试验发现，该锦葵素‑3‑O‑阿拉伯糖苷单体能够显著抑制α‑葡萄糖苷酶的活性，可用于制备α‑葡萄糖苷酶抑制剂。

技术领域

本发明涉及天然产物的分离纯化领域，具体涉及一种锦葵素-3-O-阿拉伯糖苷的分离纯化方法及其在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。

背景技术

糖尿病是世界范围内常见的慢性疾病之一，糖尿病患者通常伴随着高血糖症状，长期的高血糖能够引起神经、心脏、血管和肾脏等组织器官的损害，并引起多种急慢性并发症的发生。据世界卫生组织(WHO)统计数据显示，2014年全球有4.22亿的糖尿病患者，其中2型糖尿病最为常见。近年来随着人们饮食习惯、生活方式的改变及老龄化进程的加速，我国糖尿病的患病率急速上升，至2016年底我国的糖尿病患者数量已达到1.1亿。因此，有关糖尿病防治的研究有着极为重要的意义。

α-葡萄糖苷酶(alpha-D-glucoside glucohydrolase,EC 3.2.1.20)又称为α-D-葡萄糖苷酶水解酶，是糖苷水解酶GH31家族中的膜结合酶，包括蔗糖酶、麦芽糖酶、异麦芽糖酶等，主要存在于小肠绒毛粘膜刷状缘细胞中。进食后，α-葡萄糖苷酶可以将食物中的碳水化合物水解为葡萄糖，葡萄糖被吸收后进入血液循环导致血糖升高，因此，α-葡萄糖苷酶是控制餐后血糖的主要靶酶之一。目前，国内上市的α-葡萄糖苷酶抑制剂主要有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇，使用这些抑制剂通常会引起胃肠道的不良反应，如腹胀、排气等。因此，挖掘安全有效的食品功能因子，靶向抑制α-葡萄糖苷酶活性，对于降低糖尿病的发病率及改善糖尿病患者的健康状况将是一个行之有效的策略。当前国内外大量的研究人员已聚焦于食源性功能因子，试图从食物中筛选出活性优良且不会对人体造成副反应的α-葡萄糖苷酶抑制剂。目前，已有报道，食源性来源的黄酮类化合物、生物碱、酚类化合物、姜黄素类化合物、萜类化合物在体外具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，且活性优于阳性药物阿卡波糖，但有关花色苷的α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究报道不多，目前已发现矢车菊素-3-O葡萄糖苷具有α-葡萄糖苷酶活性。

蓝莓，又称越橘、蓝浆果，属杜鹃花科，越橘属植物，不仅富含人体所需的基础营养成分，而且还富含多种不同种类的花色苷，具有活化视网膜、抗炎和抗肿瘤作用。我国的蓝莓栽培起步较晚，目前主要以直接鲜食消费为主，或加工成果酱、果汁、果酒等初级产品，有关高附加值的蓝莓产品在国内外市场上却寥寥无几。

因此，探索一种从蓝莓中分离制备高纯度花色苷单体的方法对蓝莓的深入研究及应用具有重大的意义。但由于花色苷类化合物结构相似，极性差异较小，导致高纯度花色苷单体的分离纯化极其困难。但目前，已经有报道分离纯化得到高纯度花色苷单体。

如公开号为CN 106366141 A的中国专利文献公开了一种分离制备天竺葵素-3-O-葡萄糖苷单体的方法，以草莓为原料，通过冷冻干燥、醇提浓缩、分级萃取、AB-8大孔树脂纯化制备得到。又如公开号为CN 106831911 A的中国专利文献公开了一种从蓬蘽中分离纯化天竺葵素-3-O-葡萄糖苷单体的方法，包括醇提浓缩、乙酸乙酯萃取、AB-8大孔树脂及高速逆流色谱。上述技术方案中虽然均制备得到了高纯度的花色苷单体，但主要原因在于草莓和蓬蘽中花色苷组成简单，仅含矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵素-3-O-葡萄糖苷和天竺葵素-3-O-芸香糖苷的3种花色苷化合物，其中天竺葵素-3-O-葡萄糖苷占总花色苷含量的80％以上。

但对于如蓝莓(含有至少12种结构相似的花色苷化合物)等花色苷组成复杂的原料，上述的技术方案则难以实现高纯度花色苷单体的纯化与制备。目前，通过单一的柱层析或色谱技术制备得到的高纯度花色苷均为花色苷混合物，而非高纯度花色苷单体。