[发明专利]苦瓜长绿2号杂交种子纯度鉴定特异性标记及方法有效
| 申请号： | 201810530683.X | 申请日： | 2018-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN108411029B | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 姚春鹏;张长远;张晓爱;吴廷全;金庆敏;李海达;王瑞娟 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院蔬菜研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 郑莹 |
| 地址： | 510640 广东省广州市天*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 特异性标记 苦瓜 杂交种子纯度 杂交种子 父本 分子标记引物 种子纯度鉴定 标记引物 传统杂交 快速检测 母本种子 商业应用 低成本 高通量 替代 | ||
1.一种苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定特异性标记，包括母本P091728中的特异性标记P1-A、P1-C和父本S917007中的特异性标记P2-B、P2-D，其中P1-A的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，P1-C的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，P2-B的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，P2-D的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.一种苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定分子标记引物，包括SSR191192和SSR203204，SSR191192用于扩增P1-A和P2-B，SSR203204用于扩增P1-C和P2-D，其中P1-A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，P1-C的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，P2-B的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示，P2-D的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
进一步地，SSR191192的核苷酸序列为：
SSR191192-F：5’-TGACATCCTTCTTGCCTCTTACA-3’，
SSR191192-R：5’-TGAAACGGAACGAAACCTCA-3’；
SSR203204的核苷酸序列为：
SSR203204-F：5’-TTGAACGCCCTGTGACTTTAGC-3’，
SSR203204-R：5’-TTTTCGTCTTCCAATGAGCC-3’。
3.根据权利要求2所述的苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定分子标记引物在苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定中的应用。
4.一种苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定方法，以权利要求1所述的苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定特异性标记为特异性标记，包括母本P091728中的特异性标记P1-A、P1-C和父本S917007中的特异性标记P2-B，和P2-D，具体步骤如下：
提取苦瓜幼苗基因组DNA；
以苦瓜幼苗基因组DNA为模板，使用分子标记引物进行PCR扩增；
对扩增的产物进行分析，同时具有P1-A、P1-C、P2-B和P2-D四个特异性标记的待测苦瓜单株为真正的杂交种，否则为假杂交种。
5.根据权利要求4所述的苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定方法，其特征在于：分子标记引物包括SSR191192和SSR203204，SSR191192用于扩增P1-A和P2-B，SSR203204用于扩增P1-C和P2-D；进一步地，SSR191192的核苷酸序列为：
SSR191192-F：5’-TGACATCCTTCTTGCCTCTTACA-3’，
SSR191192-R：5’-TGAAACGGAACGAAACCTCA-3’；
SSR203204的核苷酸序列为：
SSR203204-F：5’-TTGAACGCCCTGTGACTTTAGC-3’，
SSR203204-R：5’-TTTTCGTCTTCCAATGAGCC-3’。
6.根据权利要求5所述的苦瓜‘长绿2号’杂交种子纯度鉴定方法，其特征在于：对扩增的产物进行凝胶电泳，对电泳结果进行分析，同时具有亲本四条特异条带的待测苦瓜单株为真正的杂交种，否则为假杂交种。
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