[发明专利]一种短管赤眼蜂DNA酶及其生产方法和应用

权利要求书

1.一种短管赤眼蜂DNA酶，其特征在于，所述短管赤眼蜂DNA酶的氨基酸序列和编码该氨基酸序列的核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。

2.一种生产权利要求1所述的短管赤眼蜂DNA酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将短管赤眼蜂基因LOC111693613进行密码子优化；

S2：将S1得到的核苷酸序列克隆到重组质粒进行基因扩增；

S3：将S2得到的基因片段导入表达载体得到重组表达载体；

S4：将S3中得到的重组表达载体转化入毕赤氏酵母的感受态细胞中；

S5：将S4中转化成功的感受态细胞进行筛选，得到高产量表达短管赤眼蜂DNA酶的毕赤氏酵母菌株Pichia-TPDNase；

S6：将S5中得到的毕赤氏酵母菌株Pichia-TPDNase进行大规模培养，分离纯化发酵液得到短管赤眼蜂DNA酶。

3.根据权利要求2所述的生产短管赤眼蜂DNA酶的方法，其特征在于，在S2中，将S1得到的核苷酸序列克隆到质粒pUC57的EcoRV位点进行基因扩增。

4.根据权利要求2所述的生产短管赤眼蜂DNA酶的方法，其特征在于，所述S3包括以下步骤：

S31：将表达载体进行双酶切得到线性化的表达载体；

S32：将S2中得到的基因片段与S31得到的线性化的表达载体进行同源重组。

5.根据权利要求2所述的生产短管赤眼蜂DNA酶的方法，其特征在于，在S31 中，双酶切位点为SnaBI/NotI酶切位点。

6.根据权利要求2所述的生产短管赤眼蜂DNA酶的方法，其特征在于，所述S4包括以下步骤：

S41：制备毕赤氏酵母感受态细胞；

S42：将S3中得到的重组表达载体经测序确认后，用质粒提取试剂盒进行提取；

S43：用限制性内切酶将S42得到的质粒进行线性酶切，纯化得到DNA片段；

S44：将S43得到的DNA片段通过电击法转化到S41中得到的毕赤氏酵母感受态细胞中。

7.根据权利要求6所述的生产短管赤眼蜂DNA酶的方法，其特征在于，在S41中，所述毕赤氏酵母感受态细胞为毕赤氏酵母GS115感受态细胞。

8.根据权利要求2所述的生产短管赤眼蜂DNA酶的方法，其特征在于，在S5中，将转化成功的毕赤氏酵母感受态细胞涂布到遗传霉素抗生素的YPD平板上进行筛选。

9.一种检测权利要求1所述的短管赤眼蜂DNA酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将闭合环状双链质粒DNA反应缓冲液、短管赤眼蜂DNA酶以及灭菌双蒸水加样到离心管中并混匀；

(2)在37℃的条件下孵育1-10分钟；

(3)在70℃孵育5-20分钟后离心，进行琼脂糖凝胶电泳；

(4)电泳结束后染色并用凝胶成像仪照相分析。

10.根据权利要求1所述的短管赤眼蜂DNA酶在致病菌核酸检测试剂盒中的应用。