[发明专利]一种制备羌活人工种子的方法及人工种子的扩繁方法

权利要求书

1.一种制备羌活人工种子的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将1.3×10⁴～1.5×10⁴个羌活体细胞胚放入1400～1600mL培养液甲中并混匀，室温静置孵育2～5分钟；

所述培养液甲的制备方法：每升1/10B5培养基中加入1.8～2.2mg 6～BA、0.9～1.1mgNAA、18～22g蔗糖、0.9～1.1g低分子量壳聚糖、0.9～1.1g草酸和36～44g海藻酸钠；

所述1/10 B5培养基：(NH4)₂SO₄0.134g/L、KNO₃ 3g/L、NaH₂PO₄ 0.15g/L、MgSO₄·7H₂O0.5g/L、CaCl₂·2H₂O 0.15g/L、MnSO₄·4H₂O 10g/L、ZnSO₄·7H₂O 2g/L、H₃BO₃ 3g/L、KI0.75g/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.25g/L、CuSO₄·5H₂O 0.025g/L、CoCl₂·6H₂O 0.025g/L、Na₂-EDTA3.725g/L、FeSO₄·7H₂O 2.785g/L、维生素B1 1g/L、维生素B6 0.1g/L、烟酸0.1g/L、肌醇1g/L、蔗糖30g/L，加水至1L；

S2、用胶头滴管吸取步骤S1得到的孵育后的体细胞胚，并逐滴滴加在装有2000～4000mL 0.5～1.5g/100mL CaCl₂水溶液的烧杯中，室温静置孵育20～40min，弃上清液，得到在CaCl₂水溶液中孵育后的体细胞胚，再用去离子水冲洗3～4次，获得羌活人工种子。

2.如权利要求1所述制备羌活人工种子的方法，其特征在于：所述步骤S1中，所述孵育的条件为：室温静置孵育3分钟。

3.如权利要求1所述制备羌活人工种子的方法，其特征在于：所述步骤S2中，所述孵育的条件为：室温静置孵育30分钟。

4.如权利要求1所述制备羌活人工种子的方法，其特征在于：所述步骤S1中，所述培养液甲的制备方法：每升1/10B5培养基中加入2mg 6～BA、1mg NAA、20g蔗糖、1g低分子量壳聚糖、1g草酸和40g海藻酸钠。

5.如权利要求1所述制备羌活人工种子的方法，其特征在于：所述步骤S1中，所述培养液甲的pH为6.0。

6.如权利要求1所述制备羌活人工种子的方法，其特征在于：所述步骤S1中羌活体细胞胚、所述培养液甲和所述步骤S2中CaCl₂水溶液的配比如下：1.5×10⁴个羌活体细胞胚：1500mL培养液甲：3000mL CaCl₂水溶液。

7.如权利要求1～6任一所述制备羌活人工种子的方法制备所得羌活人工种子的扩繁方法，其特征在于：包括如下步骤：

S21、将步骤S2得到的羌活人工种子置于B5固体培养基上，20～25℃、光照强度2800～3000lx，12小时光照/12小时黑暗，光暗交替静置培养18～20d；

S22、将步骤S21得到的培养后的羌活小苗置于空气湿度90％～95％，光照强度2800～3000lx，20～25℃、12小时光照/12小时黑暗，光暗交替的条件下放在培养基中培养23～25d；

所述B5固体培养基：每升B5液体培养基中加入50g琼脂；

所述B5液体培养基：(NH4)₂SO₄1.34g/L，KNO₃30g/L，NaH₂PO₄1.5g/L，MgSO₄·7H₂O5g/L，CaCl₂·2H₂O1.5g/L，MnSO₄·4H₂O10g/L，ZnSO₄·7H₂O2g/L，H₃BO₃3g/L，KI0.75g/L，Na₂MoO₄·2H₂O0.25g/L，CuSO₄·5H₂O0.025g/L，CoCl₂·6H₂O0.025g/L，Na₂-EDTA3.725g/L，FeSO₄·7H₂O2.785g/L，维生素B1：1g/L维生素B6：0.1g/L，烟酸0.1g/L，肌醇1g/L，蔗糖30g/L，加水至1L。

所述步骤S22所用培养基：取砂子，用水冲洗，然后用5g/100mL多菌灵水溶液拌湿，10分钟后用水冲洗3遍。