[发明专利]一组可视化检测幽门螺旋杆菌的引物和试剂盒

说明书

本发明涉及一组可视化检测幽门螺旋杆菌的引物和试剂盒，涉及分子检测技术领域。本发明提供的可视化检测幽门螺旋杆菌的引物包括外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP和环引物LB；所述F3的序列如SEQ ID NO.1所示，所述B3的序列如SEQ ID NO.2所示；所述FIP的序列如SEQ ID NO.3所示，所述BIP的序列如SEQ ID NO.4所示；所述LB的序列SEQ ID NO.5所示。本发明提供的引物能够实现幽门螺旋杆菌高特异性、高灵敏度的检测。

技术领域

本发明涉及分子检测技术领域，具体涉及一组可视化检测幽门螺旋杆菌的引物和试剂盒。

背景技术

幽门螺旋杆菌(HelicobacterPylori，HP)是人体胃粘膜内的一种螺旋状革兰氏阴性细菌。这种细菌是导致慢性胃炎、胃溃疡以及十二指肠溃疡甚至胃癌的元凶。一般认为胃幽门螺旋杆菌感染的临床过程是这样的：胃幽门螺旋杆菌经口到达胃粘膜后定居感染，经数周或数月引发慢性、浅表性胃炎，数年或数十年后发展成为十二指肠溃疡、胃溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤、慢性萎缩性胃炎等，而后者是导致胃癌最危险的因素。专家们认为，胃幽门螺旋杆菌感染使患胃癌的危险增加了2.7～12倍，如果没有幽门螺旋杆菌感染，至少有35～89％的胃癌不会发生。

中国专利CN102688505A公开了一种检测幽门螺旋杆菌胃内分布的组合物及试剂，该组合物和试剂在胃镜下可以观察到幽门螺旋杆菌在胃内的分布情况。但是，该专利方法在体内进行，对实验操作要求高，而且取活检时带有一定盲目性。

中国专利CN103293305A公开了一种口腔螺旋杆菌感染检测方法及用于检测的唾液试板，取唾液置于试杯内，并滴加缓冲液充分混匀，吸取混合液滴入唾液测试板的加样窗口，5～15分钟观察结果。检测方法中使用的唾液测试板具有唾液测试条，唾液测试条具有玻璃纤维层，唾液吸收纸层、胶体金纸层、玻璃纤维层、吸收纸层依次首尾相连粘贴在一起，在玻璃纤维层上沿吸收纸层至胶体金纸层方向依次设有对照线、测试线，其中对照线上附有羊多克隆抗体，测试线上附有尿素酶抗体或鞭毛抗体，胶体金纸层上附有尿素酶抗体胶体金或鞭毛抗体胶体金。尿素酶抗体或鞭毛抗体是分别通过有毒型螺旋杆菌释放的尿素酶或鞭毛抗原制备出的抗体。但是，该专利方法原料复杂，成本高。

中国专利CN105755105A公开基于尿素酶的促进尿素分解而产生氨，导致指示剂变色的原理来判定检测结果的方法，该方法中使用尿素酶容易受到外界环境条件的影响而失活，因而检测结果经常出现假阴性。

目前幽门螺旋杆菌的检测需要一种更为高效的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一组可视化检测幽门螺旋杆菌的引物和试剂盒。本发明提供的引物能够实现幽门螺旋杆菌高特异性、高灵敏度的检测。

本发明提供了一组可视化检测幽门螺旋杆菌的引物，包括外引物对F3和B3、内引物对FIP和BIP和环引物LB；所述F3的序列如SEQ ID NO.1所示，所述B3的序列如SEQ IDNO.2所示；所述FIP的序列如SEQ ID NO.3所示，所述BIP的序列如SEQ ID NO.4所示；所述LB的序列SEQ ID NO.5所示。

本发明还提供了一种基于上述技术方案所述引物的试剂盒，包括上述技术方案所述引物、dNTP、BstDNA聚合酶和含阴阳指示剂的反应缓冲液。

优选的是，所述阴阳指示剂包括phenolsulfonphthalein。

优选的是，所述外引物的使用终浓度各为0.2μM。

优选的是，所述内引物的使用终浓度各为1.6μM。

优选的是，所述环引物的使用终浓度为0.8μM。