[发明专利]一种基于RPA技术的石渠棘球绦虫检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.检测或辅助检测石渠棘球绦虫的成套试剂，由引物对和探针组成；

所述引物对由引物甲和引物乙组成；所述引物对的靶序列含有特异DNA片段；所述特异DNA片段如SEQ ID No.1第44-360位所示；

所述引物甲如SEQ ID No.2所示；

所述引物乙如SEQ ID No.3所示；

所述探针依次由DNA片段甲、四氢呋喃和DNA片段乙组成；

所述DNA片段甲如SEQ ID No.4所示；

所述DNA片段乙如SEQ ID No.5所示。

2.根据权利要求1所述的成套试剂，其特征在于：所述引物甲、所述引物乙和所述探针的摩尔量比为7:7:2。

3.根据权利要求1或2所述的成套试剂，其特征在于：

所述DNA片段甲自5’端起最后一位碱基被荧光基团修饰；

所述DNA片段乙自5’端起第一位碱基被淬灭基团修饰。

4.一种检测或辅助检测石渠棘球绦虫的RPA试剂盒，包括权利要求1中所述的引物对或权利要求1-3任一所述的成套试剂。

5.权利要求1-3任一所述的成套试剂或权利要求4所述的试剂盒在如下A1）-A3）中任一种中的应用：

A1）制备检测或辅助检测石渠棘球绦虫的产品；

A2）制备检测或辅助检测待测样品是否感染石渠棘球绦虫的产品；

A3）制备检测或辅助检测待测病原体是否为石渠棘球绦虫的产品。

6.一种检测或辅助检测待测样品是否感染石渠棘球绦虫的方法，为如下B1）或B2）或B3）：

B1）以待测样品的基因组DNA为模板，采用权利要求1-3任一所述的成套试剂进行RPA扩增，根据RPA扩增结果判断待测样品是否感染石渠棘球绦虫：

若在RPA扩增的10min内扩增曲线的荧光信号值超过阈值且出现拐点，则待测样品感染石渠棘球绦虫；

若在RPA扩增的10min内扩增曲线的荧光信号值未超过阈值或未出现拐点，则待测样品未感染石渠棘球绦虫；

B2）以待测样品的基因组DNA为模板，采用权利要求1中所述的引物对进行PCR扩增，根据PCR扩增结果判断待测样品是否感染石渠棘球绦虫：

若PCR扩增得到大小为317bp的条带，则待测样品感染石渠棘球绦虫；

若PCR扩增未得到大小为317bp的条带，则待测样品未感染石渠棘球绦虫；

B3）检测待测样品的基因组DNA是否含有权利要求1中所述的特异DNA片段：

若待测样品的基因组DNA含有权利要求1中所述的特异DNA片段，则待测样品感染石渠棘球绦虫；

若待测样品的基因组DNA不含有权利要求1中所述的特异DNA片段，则待测样品未感染石渠棘球绦虫；

所述方法为非疾病诊断和治疗目的。

7.一种检测或辅助检测待测病原体是否为石渠棘球绦虫的方法，为如下C1）或C2）或C3）：

C1）以待测病原体的基因组DNA为模板，采用权利要求1-3任一所述的成套试剂进行RPA扩增，根据RPA扩增结果判断待测病原体是否为石渠棘球绦虫：

若在RPA扩增的10min内扩增曲线的荧光信号值超过阈值且出现拐点，则待测病原体为石渠棘球绦虫；

若在RPA扩增的10min内扩增曲线的荧光信号值未超过阈值或未出现拐点，则待测病原体不为石渠棘球绦虫；

C2）以待测病原体的基因组为模板，采用权利要求1中所述的引物对进行PCR扩增，根据PCR扩增结果判断待测病原体是否感染石渠棘球绦虫：

若PCR扩增得到大小为317bp的条带，则待测病原体为石渠棘球绦虫；

若PCR扩增未得到大小为317bp的条带，则待测病原体不为石渠棘球绦虫；

C3）检测待测病原体的基因组DNA是否含有权利要求1中所述的特异DNA片段：

若待测病原体的基因组DNA含有权利要求1中所述的特异DNA片段，则待测病原体为石渠棘球绦虫；

若待测病原体的基因组DNA不含有权利要求1中所述的特异DNA片段，则待测病原体不为石渠棘球绦虫；

所述方法为非疾病诊断和治疗目的。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述大小为317bp的DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID No.1第44-360位所示。