[发明专利]一种玉米赤霉烯酮定量快速检测卡及其检测方法和制备方法

说明书

本发明公开了一种玉米赤霉烯酮定量快速检测卡及其制备方法，包括依次粘贴设置于底板上的样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上具有包被有ZEA半抗原‑载体蛋白偶联剂的检测线和包被有羊抗鼠抗体的质控线，待检样本溶液在滴加到所述样品垫前与偶联有ZEA抗体的乳胶微球进行混合、孵育处理；其检测方法包括预热、加液、孵育、反应和读取结果；本发明所述检测卡无需含金标抗体的释放垫，用于与检测样本溶液混合的偶联有ZEA抗体的乳胶微球，颜色鲜艳易判别，且偶联抗体为化学键偶合，比胶体金物理吸附稳定性好，检测准确度和精密度高；批次间差异性小成本低；另外，本发明所述检测卡的检测方法操作简易，适于批量化生产和应用。

技术领域

本发明是涉及一种玉米赤霉烯酮定量快速检测卡及其检测方法和制备方法，属于生物 检测技术领域，特别适用于粮油和谷物类的玉米赤霉烯酮的定量快速检测。

背景技术

玉米赤霉烯酮又称F-2毒素，它首先从有赤霉病的玉米中分离得到。玉米赤霉烯酮其 产毒菌主要是镰刀菌属的菌侏，如禾谷镰刀菌和三线镰刀菌。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、 小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物。其中玉米的阳性检出率为45％，最高含毒量可达到 2909mg/kg；小麦的检出率为20％，含毒量为0.364～11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐热性 较强，110℃下处理1h才被完全破坏。玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，主要作用于生殖系统，可使家畜，家禽和实验小鼠产生雌性激素亢进症。妊娠期的动物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产，死胎和畸胎。食用含赤霉病麦面粉制作的各种面食也可引起中枢神经系统的中毒症状，如恶心、发冷、头痛、神智抑郁和共济失调等。

玉米赤霉烯酮属于霉菌毒素的一种，我国国家标准GB2761-2017食品安全国家标准食 品中真菌毒素国家限量玉米赤霉烯酮限量60ppb，目前粮油和谷物领域流行的霉菌毒素试纸 条主要为胶体金定性产品，胶体金定量产品由于准确度、精密度和稳定性很难达到要求， 一直难以占市场主导，客户只能靠酶联免疫试剂盒和仪器法如高效液相等，检测样品的具 体含量，酶联免疫试剂盒和仪器法对人员和环境的要求较高，检测时间较长；并且现有技 术还存在下述缺陷和不足：

(1)胶体金本身为暗紫红色，颜色较浅，不易判别检测结果的阴阳性；

(2)胶体金一批制金量最多约10L左右，粒径偏差较难精准控制，大量生产定量产品， 不同批容易造成大的批间差，进而影响检测结果的精度和结果稳定性；

(3)胶体金标记技术为物理吸附，较化学键偶联，产品稳定性较差；

(4)目前市场胶体金试纸条主要为定性产品，不能满足人们对操作快速、简单、人员 要求低、成本低、肉眼可视的定量产品的应用需求，且现有定性筛选，假阴性和假阳性较高；

(5)烧金、标记抗体工作量较大，工艺繁琐，产出少，浪费人力物力。

不仅如此，由于ZEA抗体和抗原的特殊性，胶体金标记ZEA技术的变异系数较大，影响检测精度；如王桂芳等人采用胶体金测试条法快速定量测定粮食中的玉米赤霉烯酮，并与液相色谱法相比较(胶体金测试条法对粮食中玉米赤霉烯酮快速定量测定的应用研究，王桂芳、李培真、曹阳、郭健、刘美辰，《粮食科技与经济》2014年2月第39卷第1期)， 虽然验证了此方法在检测粮食中玉米赤霉烯酮的实用性，但是其检测结果中小麦的变异系 数(RSD或CV值)为12.4-32.6，玉米的变异系数(RSD或CV值)为11.0-15.1，明显其 变异系数较大，测定准确度偏低。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题和需求，本发明的目的是提供一种玉米赤霉烯酮定量快 速检测卡及其检测方法，将待检测样液提前与乳胶微球混合制得含ZEA抗体的反应液后再 滴加到检测卡上进行检测，提高了检测结果的准确度和稳定性，解决了变异系数大的问题， 操作和制作简单，成本低廉，适于大批量产出和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：