[发明专利]提高单针藻细胞油脂产率的方法

权利要求书

1.提高单针藻细胞油脂产率的方法，其包括如下步骤：步骤1）制备产黄纤维单胞菌种子液，步骤2）制备单针藻液，步骤3）制备黑曲霉种子液，步骤4）混合培养单针藻，步骤5）提取油脂；

所述步骤1）制备产黄纤维单胞菌种子液，包括如下步骤：将产黄纤维单胞菌划线接种在斜面培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到一级种子培养基进行培养，然后接入二级种子培养基培养，获得产黄纤维单胞菌种子液；

所述步骤2）制备单针藻液，包括如下步骤：挑取单针藻，接种到含有生长培养基的容器中，光照强度5000lux，光暗周期为24h，光暗比为14:10，28℃培养，待生长至对数生长期，得到单针藻液；

所述步骤3）制备黑曲霉种子液，包括如下步骤：将黑曲霉划线接种在斜面培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到一级种子培养基进行培养，然后接入二级种子培养基培养，获得黑曲霉种子液；

所述步骤4）混合培养单针藻，包括如下步骤：将处于对数生长期的单针藻液和产黄纤维单胞菌种子液接种到含有培养基的反应池中，温度为28℃，光照强度5000lux，光暗周期为24h，光暗比为14:10，转速为100rpm，发酵时间为4天，然后接入黑曲霉种子液，继续培养3-4天，培养结束后，经过离心、洗涤和冷冻干燥后，即得到粉末；

所述步骤5）提取油脂，包括如下步骤：将粉末添加到氯仿甲醇混合溶液中，添加量为1g粉末：2ml氯仿甲醇混合溶液，微波提取，然后超声提取，再进行离心，收集氯仿相，置于氮气中吹干，并且真空干燥，得到油脂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基的组成如下：木薯渣50-70g/L，硝酸钠 2-3g/L，磷酸二氢钾 0.1-0.2g/L，碳酸钠 0.1-0.2g/L，七水硫酸镁50-70mg/L，氯化钙30-50mg/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微波提取的参数为：微波功率为100W，提取时间为30-60min，提取温度为55-60℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声提取的参数为：超声功率为200W，提取时间为30-60min，提取温度为55-60℃。