[发明专利]高起泡性禽肝蛋白粉的制备方法

权利要求书

1.一种高起泡性禽肝蛋白粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、取家禽肝脏处理为脱脂禽肝；

步骤二、取所述脱脂禽肝置于Tris-HCl缓冲液中，进行超声处理，超声处理的条件为超声功率1000W～1500W，超声功率占超声波总功率的百分比为5～9％，超声时间为4～10min，每超声2～4s，停歇1～3s；

步骤三、取超声后的脱脂禽肝Tris-HCl缓冲液离心后取上清液，之后将上清液pH调节至4.3，再次离心，收集沉淀，得到禽肝蛋白；

步骤四、将禽肝蛋白分散于磷酸缓冲液中，之后依次进行酶解和透析，最后干燥后得到改性禽肝蛋白粉粗品；

步骤五、采用凝胶过滤层析分离纯化改性禽肝蛋白粉粗品，收集分子量<5000Da的蛋白水解物，得到高起泡性禽肝蛋白粉。

2.如权利要求1所述的高起泡性禽肝蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，取禽肝，按质量比1：2～4加入水，之后匀浆1～3min，然后再加入占匀浆后禽肝后体积5～15％的异丙醇进行脱脂处理8～12h，再进行离心，取沉淀置于通风橱下使异丙醇挥发12～24h，得到所述脱脂禽肝。

3.如权利要求1所述的高起泡性禽肝蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为0.01～0.03M，pH7.5～8.5，所述脱脂禽肝与所述Tris-HCl缓冲液的质量体积比为20～30：600～800g/mL。

4.如权利要求1所述的高起泡性禽肝蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，所述酶解的具体步骤包括：首先将禽肝蛋白磷酸缓冲液于温度80～90℃湿热处理25～45min，之后将其pH调节至8.0～8.5，冷却至室温加入与所述禽肝蛋白磷酸缓冲液的质量体积比为0.04～0.06％的碱性蛋白酶，并于45～55℃进行水浴反应35～45min，反应结束后放入沸水浴灭活10～20min。

5.如权利要求4所述的高起泡性禽肝蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，所述透析的具体步骤包括：首先将酶解后的禽肝蛋白磷酸缓冲液离心去上清液，之后将上清液置于透析袋中，4℃透析24～48h，其中每隔2h更换去离子水，最后将透析液于－55～－60℃进行真空冷冻干燥24～46h，收集粉末即得到所述改性禽肝蛋白粉粗品。

6.如权利要求1所述的高起泡性禽肝蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，所述磷酸缓冲液的浓度为0.01M，所述禽肝蛋白与所述磷酸缓冲液的质量比为6～10％。

7.如权利要求1所述的高起泡性禽肝蛋白粉的制备方法，其特征在于，所述步骤五中，采用所述凝胶过滤层析分离纯化改性禽肝蛋白粉粗品的具体步骤包括：

5.1)Sephadex G-25的预处理：将葡聚糖凝胶Sephadex G-25浸泡于蒸馏水中48h，之后在100℃水浴中溶胀4h，使其充分溶胀后，加蒸馏水反复洗涤以悬浮法倾去悬浮颗粒，抽干，备用；

5.2)装柱和平衡：将已预处理好的葡聚糖凝胶Sephadex G-25用蒸馏水洗涤三次，抽干，之后用0.02mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液浸泡，超声脱气后，利用玻璃棒一次加到1.6×50cm层析柱中，同时敲击柱壁，使填料沉降均匀且紧密，使柱高达45cm，然后用所述磷酸缓冲液动态沉降24h，使填料充分溶胀，得到葡聚糖凝胶Sephadex G-25凝胶柱；

5.3)将所述改性禽肝蛋白溶解于0.01M的磷酸缓冲液作为样品，所述改性禽肝蛋白磷酸缓冲液的浓度为0.01M，之后将该样品上所述葡聚糖凝胶Sephadex G-25凝胶柱，采用pH8.0 Tris-HCl缓冲液进行洗脱，使用DHL-A恒流泵，控制流速0.3mL/min，并用自动收集器收集，每管收集3mL，收集液用考马斯亮蓝法跟踪检测，直到不再有蛋白检出，以管号为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，合并各洗脱峰的洗脱液，用pH 8.0Tris-HCl缓冲液透析72h，干燥后得到高气泡性禽肝蛋白。