[发明专利]一种快速检测塞内卡病毒的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种快速检测塞内卡病毒的试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括RPA引物探针混合液，PBST溶液，测流层析试纸条，RPA冻干酶和RPA反应预混液；所述RPA引物探针混合液中的引物的基因序列为：上游引物：5′‑AATTCCTGTTTGACCGATCTCGGCTACTGA‑3′；下游引物：5′‑biotin‑CCAGTAAAGTGGTAGGGTACGTGCAGTTGGTC‑3′；所述RPA引物探针的基因序列为：5′‑FAM‑GGCCTGTACGTCAACCCGTCTGACAGTGGCG‑THF‑TCTCGCTAACACTTC‑Spacer C3‑3′。本发明提供的检测塞内卡病毒的试剂盒特异性强，诊断准确，敏感性高于传统PCR，本发明提供的塞内卡病毒的检测方法操作极其简便快速，不仅适用于临床诊断而且可以应用于食品安全检测、养殖场现场检测、环境评估等多种领域。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，尤其涉及一种快速检测塞内卡病毒的试剂盒及其检测方法。

背景技术

A型塞内卡病毒(Senecavirus A，SVA)是小RNA病毒科塞内卡属的唯一成员，能够引起母猪严重的水疱病和新生仔猪死亡，对养殖业造成巨大损失。塞内卡病毒病是由SVA引起的动物传染病，主要感染对象是猪，不同年龄阶段的猪都易感染。SVA感染引发的水疱病与口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)、猪水疱病(swine vesicular disease，SVD)、猪水疱疹(vesicular exanthema of swine，VES)和水疱性口炎(vesicular stomatitis，VS)引起的病变极为类似，临床难以鉴别诊断，给疾病的确诊、治疗和防控带来极大的困难，因此，开发更加简便快捷，安全可靠的塞内卡病毒检测方法具有极其重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测塞内卡病毒的试剂盒及其检测方法，旨在解决上述背景技术中猪感染A型塞内卡病毒后，由于其产生的临床症状与口蹄疫、猪水疱病、猪水疱疹和水疱性口炎感染后所引起的临床症状相似，导致临床难以鉴别诊断，给疾病的确诊、治疗和防控带来很大困难的问题。

本发明是这样实现的，一种快速检测塞内卡病毒的试剂盒，该试剂盒包括RPA引物探针混合液，PBST溶液，测流层析试纸条，RPA冻干酶和RPA反应预混液；所述RPA引物探针混合液中的引物的基因序列为：

上游引物：5′-AATTCCTGTTTGACCGATCTCGGCTACTGA-3′；

下游引物：5′-biotin-CCAGTAAAGTGGTAGGGTACGTGCAGTTGGTC-3′；

所述RPA引物探针混合液中的探针的基因序列为：

5′-FAM-GGCCTGTACGTCAACCCGTCTGACAGTGGCG-THF-TCTCGCT AACACTTC-SpacerC3-3′。

优选地，所述RPA引物探针混合液中引物的浓度为10μM，探针的浓度为10μM。

本发明进一步提供了一种利用上述试剂盒快速检测塞内卡病毒的方法，该方法包括以下步骤：

(1)利用所述试剂盒对待测样品进行重组酶聚合酶扩增反应，得到扩增产物；

(2)将扩增产物滴加到测流层析试纸条上进行检验，根据试纸条上显示结果判定塞内卡病毒为阳性或阴性。

优选地，所述步骤(1)中重组酶聚合酶扩增反应的总反应体系为50μL，将浓度10μM的上游引物2.1μL，浓度10μM的下游引物2.1μL，浓度10μM的探针0.6μL，Buffer 29.5μL，蒸馏水9.2μL混匀后转入含有聚合酶、重组酶和单链结合蛋白冻干制剂的0.2mL反应管中，将4μL cDNA模板、2.5μL浓度为280mM的MgAc加入该反应管中。