[发明专利]用于提取病毒核酸的试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种用于提取血筛混检样本中病毒核酸的试剂盒和方法，试剂盒包括裂解液、结合液、第一漂洗液、第二漂洗液、洗脱液、二氧化硅磁珠、蛋白酶K和核酸助沉剂，其中，第一漂洗液含有结合液和柠檬酸钠。本发明还公开了一种快速检测血浆\血清中病毒的方法。采用本发明的试剂盒和方法，在特定的pH下可以从样本中轻松捕获微量病毒核酸，所得核酸回收率高；操作流程简洁，30min内即可完成病毒核酸的提取纯化，比现有的大多数商品化试剂盒都省时省力；而且针对的样本体积量大，可以对小体积样本合并提取，节省时间，节省试剂。

技术领域

本发明涉及核酸纯化技术领域，尤其是用于提取血清\血浆中病毒核酸的方法和试剂盒。

背景技术

核酸的提取纯化是进行分子生物学各项研究的基础，特别是在分子诊断领域，PCR、RT-PCR、Northern blot、RT-qPCR、cDNA文库构建、酶切等技术手段都需要纯度高、完整性好的核酸。但由于外源及内源性核酸酶的存在及其酶活性相当稳定等原因，使得提取和纯化高质量的核酸相对比较困难。核酸提取试剂配方对核酸的质量和得率有很大的影响，因此研发高效快速、回收范围广、得率高的核酸提取试剂是本领域不断探索的课题。磁珠法作为近年来兴起的新型核酸提取方法，主要原理是基于磁性纳米材料一在高盐环境下对核酸进行特异性的吸附，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中被洗脱下来，从而达到对核酸进行提取纯化的目的。

目前市场上用于核酸提取的裂解液种类较多，常见的有经典的TRIzol、CATB-LiCl、碱裂解液等。TRIzol含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞内源性核酸酶，保持提取核酸的完整性；但是其用时操作繁琐、费时，提取样本中核酸的质量不佳。CATB-LiCl在低离子强度的溶液中可与核酸形成不溶的复合物，有利于去除多糖、酚类等杂质，常被用来提取植物样本材料的核酸，有局限性。碱裂解是最早的核酸的提取方法，但利用碱裂解液裂解所得的核酸含有大量杂质，严重干扰下游实验。经检索，从用于血液筛查(简称血筛)的混检样本中血浆或血清等样本中快速提取病毒核酸的试剂盒，及其在利用磁珠法提取病毒核酸中的应用还未见报道。

传统的核酸提取方法用时操作繁琐、费时，如硅胶膜吸附法需要多次离心，容易出现交叉污染等问题。然而，目前市面上的磁珠法病毒核酸提取试剂盒主要是针对小样本小体积的试验，对于血站或临床批量的体检样本，无法做到一次性快速提取，耗费时间较长，而且分多次提取，发生污染的风险会增大。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种用于血液筛查的混检样本中病毒核酸的提取方法，采用该提取方法提取病毒核酸具有快速高效的优势，而且该方法能提取大体积样本中的病毒核酸，样本体积可达2.4ml。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案包括以下几个方面：

在一个方面，本发明提供一种用于提取血筛混检样本中病毒核酸的试剂盒，包括裂解液、结合液、第一漂洗液、第二漂洗液、洗脱液、二氧化硅磁珠、蛋白酶K和核酸助沉剂，其中，所述第一漂洗液含有所述结合液和柠檬酸钠。优选地，所述裂解液含有高氯酸钠、Tris-HCl、EDTA、DTT和Triton X-100。

优选地，所述结合液中含有高氯酸钠、DEPC水和无水乙醇。

优选地，所述第二漂洗液中含有DEPC水和无水乙醇。

优选地，所述洗脱液为Tris-HCl和DEPC水的溶液。

优选地，所述蛋白酶K采用DEPC水溶解。

在另一个方面，本发明提供一种血筛混检样本中病毒核酸的提取方法，采用上述试剂盒提取病毒核酸，具体包括如下步骤：(1)样本准备：取灭活处理后的血清或血浆若干份，每份体积相同，分别标记和编号，将若干份血清或血浆合并成1份待测样本；