[发明专利]一种外泌体的富集方法

说明书

本发明涉及一种外泌体富集方法及其在生物样品中外泌体快速富集中的应用。首先对生物样品差速离心处理或超滤处理，去除样品中的细胞类干扰；向上清液中加入PEG溶液，在低温下静置一段时间；将样品放置合适温度使成均匀溶液，在低速下离心，所得沉淀即为外泌体。

技术领域

本发明涉及一种外泌体富集方法及其在生物样品中外泌体的快速富集的应用。具体地说是一种基于低温条件下，PEG聚合物捕获外泌体，进而在低速离心条件下富集外泌体的方法。

背景技术

在十九世纪六七十年代，研究人员在细胞外，如软骨、血和细胞培养液中，发现了许多膜包被的囊泡小体(J.Cell Biol.1969,41,59-72.)。起初，人们发现其中的某些囊泡是通过细胞质膜向外出芽的方式进行释放。直到80年代，人们又发现了一种更为复杂的囊泡分泌方式。细胞内的核内体先形成多泡小体，并通过质膜融合的方式将其中包含的小囊泡释放到细胞外(J.Biol.Chem.1987,262,9412-9420)。人们详细地研究了这类囊泡的分泌形式，并首次将这一类囊泡命名为外泌体(exosomes)。后续的研究表明，包括Exosome在内，所有的外泌体都包含有蛋白质、核酸物质、脂质物质。这些物质赋予了外泌体很多功能功能，翻开了外泌体研究新的篇章(Stem Cells 2015,33,1200-1212)。

当前的外泌体富集方法中，是超速离心和密度梯度离心法是公认的金标准，但是对设备的依赖性限制了他们的广泛使用。基于高分子聚合物的沉淀富集方法因其操作简单而被广泛采用。但是该方法通常需要过夜孵育处理才能实现较高的回收效率。我们在研究中发现，合适浓度的PEG可以实现外泌体的高回收率提取。在低温环境下，将PEG加入到生物样品溶液中，通过短时间的静置后，在合适的温度下溶解，通过低速离心可以获得外泌体成分。因此，选择合适的PEG沉淀溶液，通过低温处理，可以在短时间内实现外泌体成分的富集，对于分析生物样本，尤其是大样本量的临床体液样本，具有较大意义。

参考文献：

1.Anderson,H C,Vesicles associated with calcification in the matrixof epiphyseal cartilage[J].J.Cell Biol.1969,41(1):59-72.

2.Johnstone,R M；Adam,M；Hammond,J；Orr,L；Turbide,C,Vesicle formationduring reticulocyte maturation.Association of plasma membrane activities withreleased vesicles(exosomes)[J].J.Biol.Chem.1987,262(19):9412-9420.

3.Vaidyanathan,R；Naghibosadat,M；Rauf,S；Korbie,D；Carrascosa,L G；Shiddiky,M J；Trau,M,Detecting exosomes specifically:a multiplexed devicebased on alternating current electrohydrodynamic induced nanoshearing[J].Anal.Chem.2014,86(22):11125-11132.

发明内容

本发明的目的在于提供一种外泌体富集方法，可以实现生物样品中外泌体的快速富集。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：