[发明专利]一种外泌体的富集方法

权利要求书

1.一种外泌体的富集方法，其特征在于，包括如下步骤：

1) 将生物样品进行预处理；

2) 向步骤1）所得的生物样品中加入PEG溶液，以及加入或不加入有机试剂和/或盐溶液；

3) 将步骤2）所得的溶液混合均匀，放置低温环境下静置冻结，然后将样品放置一定温度下融化使成均匀溶液；步骤3）所得的溶液混合均匀，放置低温环境下静置冻结所放置的温度为-200℃至-10℃；

4) 将步骤3）所得的溶液将样品于低速下离心，所得沉淀即为外泌体，步骤4）形成均匀溶液的样本，在500g-5000g条件下进行离心。

2.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：

生物样品为细胞培养液，菌株培养液，组织培养液。

3.按照权利要求2所述的富集方法，其特征在于：

生物样品为血液、尿液、唾液、精液、胆汁、脑脊液、呼吸道清洗液中的一种或二种以上。

4.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：

生物样品的体积为1µL-100mL。

5.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：生物样品进行预处理方法为：

首先在200g-500g条件下离心3-15分钟，然后吸取上清液A；

上清液A在2000g-5000g条件下离心10-30分钟，然后吸取上清液B；

最后上清液B在10000g-20000g条件下离心0.5-3h或经过0.1-0.3微米的滤膜进行过滤，得所需要液体。

6.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：

所使用的PEG的分子量为2000-50000 Da，使其于体系中加入的终质量浓度为2-10%。

7.按照权利要求1或6所述的富集方法，其特征在于：

配制的质量浓度为30-80%的PEG溶液作为母液加入到生物样品中，所选溶液体系为下列溶剂中的一种，纯水，细胞培养常用PBS缓冲液，磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液碱性溶剂，pH值为6-8。

8.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：所述的有机溶液为DMSO，丙酮，丁醇，异丙醇，DMF中的一种或两种以上，使其在体系中最终体积浓度范围为5-80%；

加入的盐溶液中的盐为氯化钠、氯化钾、氯化钙、磷酸二氢钠的一种或两种以上，使其在体系中最终浓度范围为10-300mM。

9.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：

步骤3）所得的溶液混合均匀，放置低温环境下静置冻结静置于低温环境下的时间为1min - 60min。

10.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：

步骤3）生物样品低温静置后，置于0℃-37℃进行温度平衡融化，至样品呈均匀溶液。

11.按照权利要求1或10所述的富集方法，其特征在于：

形成均匀溶液的样本，离心时间5min-30min，形成的沉淀为外泌体。

12.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：

所获得的外泌体，溶解在PBS中，再进行一次沉淀操作，获得进一步纯化的外泌体。

13.按照权利要求1所述的富集方法，其特征在于：所述的富集方法能用于临床生物化学检测、基因组学、代谢组学或蛋白质组学分析或活性研究。