[发明专利]一种利用定量核磁测定多肽中三氟乙酸残留的方法

说明书

本发明属于三氟乙酸残留量检测技术领域，具体涉及一种利用定量核磁测定多肽中三氟乙酸残留的方法，采用定量核磁检测方法，使用环丙沙星作为氟谱内标物，本发明提供一种适用于检测多肽类药物中三氟乙酸含量的测定方法，具有样品消耗较低，节约测定成本，同时具有较高的检测精度的优点。

技术领域

本发明属于三氟乙酸残留量检测技术领域，具体涉及一种利用定量核磁测定多肽中三氟乙酸残留的方法。

背景技术

随着生物技术与多肽合成技术的日臻成熟，越来越多的多肽药物被开发并应用于临床。因适应证广、安全性高且疗效显著，多肽药物目前已广泛应用于肿瘤、肝炎、糖尿病、艾滋病等疾病的预防、诊断和治疗，具有广阔的开发前景。在多肽药物的制备过程中需要引入三氟乙酸作为溶剂，在制备/生产结束后需要去除三氟乙酸，因为三氟乙酸作为四类溶剂，在临床使用中具有毒性，所以需要严格控制成品中性肽成品中三氟乙酸的含量。目前，针对药物和环境中三氟乙酸残留测定，常用的方法有高效液相色谱法、离子色谱法或气质联用方法等，这些方法通常具有样品消耗较多的缺点，并且实验周期长、样品易污染难回收，对于制备成本较高的多肽类药物并不适用。

因此，急需一种适用于检测多肽类药物中三氟乙酸含量的测定方法，并且应该具备样品消耗较低，节约测定成本，检测精度高的优点。

发明内容

本发明提供了如下的技术方案：

一种利用定量核磁测定多肽中三氟乙酸残留的方法，采用定量核磁检测方法，使用环丙沙星作为氟谱内标物。

一种利用定量核磁测定多肽中三氟乙酸残留的方法，包括如下步骤：

S1：仪器与溶剂的准备：

①仪器：核磁共振仪和topspin3.2在线/离线处理软件；

②溶剂：三氟乙酸钠标准品、内标物环丙沙星、氘代二甲基亚砜和多肽样品；

S2：溶液的配置：

①三氟乙酸钠母液配制：精密称取三氟乙酸钠25.00mg，置10ml容量瓶中，用DMSO-d6定容，摇匀至完全溶解，再精密移取1.0ml置10ml量瓶中，用氘代二甲基亚砜定容，摇匀，即得；

②内标环丙沙星母液配制：精密称取环丙沙星25.00mg，置10ml量瓶中，用氘代二甲基亚砜定容，摇匀，即得；

③供试品溶液配制：精密称样品多肽5.00mg，再精密移取内标环丙沙星母液0.10ml置5mm样品管中，精密加入0.50ml氘代二甲基亚砜，摇匀待测；

注：①-③中的称重的误差为±0.01mg；

S3：设定所述核磁共振仪的测定基础条件：

采用QNP探头，设定采样谱宽、采样中心频率、采样点数为、采样次数、延迟时间为和脉冲角度；

S4：使用核磁共振仪得到图谱，用手动方式依次进行相位校正、基线校正和化学位移校正，并根据所选的定量峰及积分范围进行积分。

优选的，所述内标物环丙沙星的纯度为84.20±1％。

优选的，采样谱宽为237.1714ppm，采样中心频率为-100.00ppm，采样点数为64K，采样次数为64次，延迟时间为20s，脉冲角度为90°。

本发明的有益效果是：