[发明专利]一种唾液乳杆菌特异性培养基及其应用

权利要求书

1.一种唾液乳杆菌特异性筛选培养基，其特征在于，所述培养基中含有万古霉素、链霉素及唯一碳源等物质，所述培养基为液体培养基或固体培养基。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基包括如下组分：蛋白胨8-12g/L，酵母提取物4-6g/L，唯一碳源18-22g/L，无水乙酸钠1.8-2.2g/L，柠檬酸氢二胺1.8-2.2g/L，K₂HPO₄·3H₂O 2.4-2.8g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4-0.6g/L，MnSO₄·7H₂O 0.24-0.26g/L，吐温-80 0.8-1.2g/L，万古霉素18×10^-3-22×10^-3g/L，链霉素0.250-0.262g/L，pH值为4.9-5.1，余量为蒸馏水。

3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述唯一碳源为鼠李糖。

4.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述唯一碳源浓度为20g/L，万古霉素浓度为20×10^-3g/L，链霉素浓度为0.256g/L。

5.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述pH值为5。

6.一种权利要求1所述的液体培养基的制备方法，其特征在于，所述方法为：

(1)按配方称取除抗生素外的其他组分，混合后充分溶解，调pH至4.9-5.1，灭菌；

(2)将万古霉素、链霉素配溶液，通过无菌滤膜将万古霉素、链霉素溶液加入培养基中，制备得到液体培养基。

7.一种权利要求1所述固体培养基的制备方法为，其特征在于，所述方法为：

(1)按配方称取除抗生素外的其他组分，混合后充分溶解，调pH至4.9-5.1，加入18-22g/L的琼脂搅拌均匀，灭菌；

(2)将万古霉素、链霉素配溶液，通过无菌滤膜将万古霉素、链霉素溶液加入培养基中，制备得到固体培养基。

8.根据权利要求6或7所述方法，其特征在于，所述抗生素在培养基灭菌后添加，且需在培养基温度≤55℃时无菌添加。

9.一种应用所述权利要求1-4任一所述培养基分离筛选肠道菌群中唾液乳杆菌的方法，所述方法具体步骤如下：

(1)富集：取样品接种于上述液体培养基中，36-38℃下培养16-20h；

(2)稀释涂布：将富集后的菌液稀释，取80-120μl后涂布于上述固体培养基，36-38℃下培养16-20h；

(3)一级划线纯化：从固体培养基中计数范围在30-300的平板上，挑取几个菌落，在MRS固体培养基上划线，36-38℃培养46-48h；

二级划线纯化：取上述一级划线纯化后的单菌落，继续在MRS固体培养基上划线，倒置平皿，36-38℃培养46-48h；

(4)单菌扩大培养：取二级纯化后的单菌落，接种于MRS液体培养基中，36-38℃下培养16-20h；

(5)菌种鉴定。

10.根据权利要求9所述方法，其特征在于，所述步骤(5)中的菌种鉴定的具体方法为：

(1)取1ml扩培后的菌液8000rpm离心2min，取上清，菌泥用等量无菌水重悬，重悬后的菌液8000rpm离心2min，弃上清，重复洗涤两次后，取等量无菌水重悬，做为DNA模板；

(2)PCR所用引物即为16s rRNA通用引物，对DNA模板进行PCR验证。