[发明专利]一种以白介素12为活性成分的融合蛋白型药物前体

说明书

本发明涉及一种以白介素12为活性成分的融合蛋白型药物前体。所述融合蛋白型药物前体为同源或异源二聚体，二聚体中包括如下结构单元：(1)位于所述融合蛋白N端的第一结构单元：白介素12(IL‑12)的一个或两个亚基，所述的白介素12的亚基为白介素12的P35亚基或P40亚基；(2)位于所述融合蛋白C端的第二结构单元：抗体Fc片段；(3)连接片段1：连接第一结构单元和第二结构单元或连接第一结构单元内部的两个亚基；以及可选的(4)通过能够被肿瘤微环境中特异性表达的蛋白水解酶识别并水解连接片段2连接的白介素12的受体结构单元。

技术领域

本发明属于医药生物领域，具体而言，涉及一种以白介素12为活性成分的融合蛋白型药物前体。

背景技术

白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)又名细胞毒淋巴细胞成熟因子(cytotoxic lymphocyte maturation factor,CLMF)，也称为自然杀伤细胞刺激因子(natural killer cell stimulation factor,NKSF)，是1989年发现的白细胞介素家族的成员。IL-12是一种异源二聚体细胞因子，由p35和p40两个亚基通过二硫键组成，主要由树突状细胞(DC)、巨噬细胞、单核细胞、B淋巴细胞以及其他抗原递呈细胞(APC)产生，能促进T辅助细胞1(Th1)的增殖；诱导NK细胞和T细胞产生γ干扰素；提高NK细胞的细胞毒作用；促进细胞毒性T细胞的形成等。

IL-12最初在1989年被鉴定为对外周血淋巴细胞具有多重生物学作用的天然杀伤(NK)细胞刺激因子【1】。IL-12主要由抗原呈递细胞(APC)如树突状细胞(DC)，单核细胞，巨噬细胞和B细胞通过在Toll样受体相互作用下产生【2】因此，IL-12作为早期促炎细胞因子分泌以响应感染【3】。IL-12是分子量为70kDa的异二聚体，其由重(p40)和轻(p35)链亚基组成，其通过二硫键共价连接。p40可以通过吞噬细胞丰富地产生，但p35仅在低水平上普遍和组成型表达，需要与p40共表达才能分泌生物活性IL-12。在IL-12产生生物学效应的过程中p40仅发挥了媒介的作用，p35通过p40结合到细胞膜受体，两者通过由IL-12Rb1和IL-12Rb2组成的异二聚体IL-12受体(IL-12R)介导IL-12的信号传导【4】其中p35与IL-12Rb2的相互作用对向下传导信号至关重要，两个受体亚基的共表达是产生IL-12的高亲和力结合位点所必需的。p40亚基单独和受体结合可以竞争抑制IL-12的活性。在NK细胞，NK T细胞和活化的T细胞上发现IL-12R复合物【5】，同时也在髓系细胞【6】和扁桃体B细胞【7】上检测到。天然T细胞表达IL-12Rb1而不表达IL-12Rb2。在通过T细胞受体激活T细胞时，IL-12的两个受体都会被诱导，另外也会被IL-12本身，IFNγ，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和抗CD28共刺激物另外增强【8】【9】。受体的成功触发激活了Janus激酶STAT(信号转导和转录激活子)信号通路，主要导致STAT4磷酸化，其介导随后的细胞反应【10】【11】。

IL12在固有免疫和适应性免疫的作用，通过连接先天和适应性免疫应答，IL-12在调节炎症中起关键作用。炎症环境下APC释放IL-12，导致NK和T细胞的随后的激活和增殖，有这些亚类在刺激时增加其IFN-g分泌，从而诱导IL-12治疗后观察到的大部分肿瘤抑制途径。对于抗肿瘤作用，一方面IL-12和IFN-g通过诱导细胞因子和细胞溶解因子如穿孔素和颗粒酶B【12】的转录来促进其效应子功能。另一方面分泌的IFN-g参与直接肿瘤血管反应，例如ICAM-1和VCAM-1的上调和血管发生的抑制。粘附分子上调有助于白细胞募集到肿瘤组织。此外IL-12将T细胞极化为1型辅助T(Th1)效应细胞表型。IL-12进一步显著促进Th1极化通过抑制2型辅助T细胞的发育过程【13】诱导的调节性T细胞(Tregs)和Th17细胞的分化。此外IL-12可以编辑效应T细胞，以最佳产生效应记忆T细胞和T滤泡辅助细胞【14】【15】也报道了IL-12对APC的直接作用，增加了APC呈现差的免疫原性肿瘤抗原肽的能力【16】【17】。