[发明专利]一种选择性合成2;5-二羟甲基呋喃的方法

权利要求书

1.一种选择性合成2,5-二羟甲基呋喃方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)季也蒙毕赤酵母SC1103经驯化、活化和固定化后，获得固定化细胞；所述酵母驯化方法为：将季也蒙毕赤酵母SC1103菌种接入含5-羟甲基糠醛的酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中，将培养后的菌悬液接入新鲜的含5-羟甲基糠醛的酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中，继续培养；随后，将上述菌悬液接入5-羟甲基糠醛浓度逐步提高的酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中进行逐步驯化；

(2)将上述固定化细胞加入含有5-羟甲基糠醛和辅底物的缓冲液中，在10～40℃、搅拌条件下反应，得到2,5-二羟甲基呋喃；所述辅底物中还原糖的摩尔浓度为5-羟甲基糠醛的摩尔浓度的0.3～1.0倍；所述5-羟甲基糠醛浓度为50～350mM。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基的组成为1％酵母膏，2％蛋白胨，2％葡萄糖，余量为水。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述酵母驯化方法为：将季也蒙毕赤酵母SC1103菌种接入含5mM 5-羟甲基糠醛的酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中，于30±5℃、搅拌下培养12±6h后，以2％～10％的接种量将该菌悬液接入新鲜的含5mM 5-羟甲基糠醛的酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中，30±5℃、搅拌下培养12±6h；随后，以2％～10％的接种量将上述菌悬液先后接入含10mM及15mM 5-羟甲基糠醛的酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中进行逐步驯化。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)活化方法为：将驯化后的季也蒙毕赤酵母SC1103菌种接入含有15mM 5-羟甲基糠醛的酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中，于30±5℃、搅拌下培养12±6h后，以2％～10％的接种量将该菌悬液接入新鲜的含15mM 5-羟甲基糠醛的酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中，30±5℃、搅拌下培养12±6h，收集菌体细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)固定化方法为：将收集的菌体细胞按200～500mg/mL的浓度与2.5％(w/v)海藻酸钠溶液混合均匀；然后，滴入CaCl₂溶液中静置固化，用Tris-HCl缓冲液洗涤即可。

6.根据权利要求1～5任意一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述菌体浓度为20～60mg/mL缓冲液；所述5-羟甲基糠醛浓度为120～300mM。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(2)反应温度为20～35℃，反应时间为5～48h。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述辅底物为葡萄糖、木糖及水稻秸秆水解液。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述辅底物中还原糖的摩尔浓度为5-羟甲基糠醛摩尔浓度的0.5～0.7倍。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述缓冲液为乙酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液；所述缓冲液pH介于5.0～9.0，缓冲液的摩尔浓度为5-羟甲基糠醛摩尔浓度的0.5～2.0倍。