[发明专利]用于检测疱疹类病毒EBV的引物组及试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测疱疹类病毒EBV的引物组。所述引物组包括分别针对EBV基因和内标的特异性引物及探针。本发明还涉及一种用于检测疱疹类病毒EBV的试剂盒。所述试剂盒包括PCR反应液、酶混合物、阴性对照品、阳性对照品和标准品，所述PCR反应液包括检测EBV基因和内标的特异性引物及探针。本发明提供的试剂盒及其检测方法具有操作简单、检测时间短、检测敏感性高及特异性好等优点，特别适合在临床检验工作中普及应用。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种用于检测疱疹类病毒EBV的引物组及试剂盒。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)于1964年发现，以该病毒的发现者的名字Epstein和Barr命名。其属于疱疹病毒γ亚科，也被称为4型疱疹病毒。EBV基因组为双链DNA，全序列长度约为172kb。

EBV主要通过唾液、飞沫等方式入侵，在鼻咽部上皮细胞内繁殖后进入血液循环，入侵B淋巴细胞等血液细胞后，病毒基因组由线性转换为较稳定的环状结构，部分病毒还可整合入人基因组DNA。EBV在人群中广泛感染，90％以上为潜伏感染。

现已证明有多种疾病与EBV感染相关，其中血液系统疾病常见的有传染性单核细胞增多症，EBV相关嗜血细胞综合征。免疫功能正常的人初次感染EBV后约有50％表现为典型的传染性单核细胞增多症。而嗜血细胞综合征的预后差，超过50％患者死亡。免疫缺陷者感染EBV后易发生淋巴组织增生性疾病甚至恶性淋巴瘤。EBV感染还与多种肿瘤如伯基特淋巴瘤，鼻咽癌等的发展有关。

由于EBV感染时其症状轻重不一，可累及全身多个系统，临床表现也呈多样性，容易造成漏诊和误诊。所以EBV的诊断需要实验室检测方法的辅助。血清学检测以及EBV核酸检测为EBV感染的常规检验方法。在血清学检测中，目前认为抗EB-VCA-IgM阳性是急性感染的可靠标志，而结合EBV-EA-IgG抗体测定可以大大降低误诊及漏诊率。而在血浆和咽拭子中检测EBV-DNA可以有效地辅助早期的临床诊断。

实时荧光定量PCR技术是近年来发展迅速的一种核酸检测技术，使用一种带有荧光检测装置的扩增仪，荧光检测装置能够按照一定的程序周期性地发出特定波长的激发光，收集检测荧光信号，通过检测荧光信号的动态变化实时反映的每个循环的扩增水平，试验结束后可通过软件自动分析获得扩增曲线，根据扩增曲线与荧光阈值线的交点即临界值以及扩增曲线的形状，可以判断阴阳性结果，并得知样本浓度的定值结果。实时荧光PCR法因灵敏度高和特异性强，耗时时间短而在临床广泛应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测疱疹类病毒EBV的引物组和试剂盒，具有操作快速、方法简单、检测灵敏度高、特异度强和准确度好的优点。

本发明提供一种用于检测疱疹类病毒EBV的引物组，所述引物组包括如以下核苷酸序列所示的引物及探针：

EBV上游引物：

5’-GCAGCTATTTCTGGTCGCAT-3’

EBV下游引物：

5’-GAGGGCTAGGGAGAGGTAGA-3’

EBV探针：

5’-FAM-AGAGCGCCAGGAGTCCACACA-TAMRA-3’

内标上游引物:

5’-GGCATGTGGAGGAAGGTGGT-3’

内标下游引物:

5’-CCATGGACTGGCTCTCCGTT-3’

内标探针:

5’-HEX-ACGCAGCCCTGCTTCGTTCGCCG-TAMRA-3’。